| 研究課題/領域番号 |
15592023
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
保存治療系歯学
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
池田 毅 長崎大学, 医学部・歯学部附属病院, 助手 (90244079)
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| 研究分担者 |
柳口 嘉治郎 長崎大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (50264255)
横田 広彰 長崎大学, 医歯薬学総合研究科, 助手 (90301366)
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| 研究期間 (年度) |
2003 – 2004
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| キーワード | キトサン / 再生医療 / 生分解性 / 脱アセチル化度 / リゾチーム / WGA-gold conjugate / Macrophage |
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| 研究概要 |
【目的】
ラットを使用した動物実験にて、骨欠損部に填入されたキチン・キトサンの生体内における分解・吸収過程についてレクチン(WGA-gold)およびリゾチームをマーカーとして検討することにある。
【材料および方法】
6週令のWistar系雄性ラットおよび脱アセチル化度の異なる3種の綿状キチン・キトサン(0、50、100%)を用い、下顎骨下縁とオトガイ孔の間の骨表面から直径約1mm、深さ約1mmの円筒形骨窩洞を形成した後、窩洞内に填入した。術後1、2、3、4週間経過時に各々のラットを潅流固定した後、キチン・キトサンが填入されている部位を周囲の骨と共に注意深く摘出し低粘性アクリルレジンであるLR-Goldにて包埋した。厚さ約1μmの超薄切片を作製し、トルイジンブルー染色およびウサギ抗ラットリゾチーム抗体を用いてImmunogold-silver stainingを行い光学顕微鏡にて観察し、さらにWGA-Gold conjugate法にて透過型電顕観察を行った。
【結果】
術後1週間経過時ではすべての脱アセチル化度のキチン・キトサンと関連してリゾチームが認められ、特にDA=0%群に著明であった。また炎症性細胞浸潤は軽微であった。
術後2週間以降はリゾチームの発現が経時的に減少しており、術後4週間経過時ではDA=100%群ではほとんど認められなかった。
術後すべての経過期間において、脱アセチル化度が高くなるにしたがいリゾチームの発現が減少していた。
また生体内のMacrophageやMonocyteなどの貪食作用による分解を示す所見も一部みられ、脱アセチル化度の低いものほど、貪食作用を受ける可能性が明らかとなった。
【結論】
キチン・キトサンは生体内酵素であるリゾチームと反応することによって、経時的に生理的分解されることが示唆された。また、リゾチームの免疫染色の程度とキトサンの脱アセチル化度との間には関連性が認められた。
今回の組織学的観察によって、キチンの脱アセチル化度が大きいほど、生体内における吸収が速いと考えられる。
しかしながら、キチン・キトサンの分解酵素であるリゾチームは、脱アセチル化度が大きいものに対しては、効果的でないとされており、また電顕所見より直接貪食される頻度も高くないようであり、今回の結果はリゾチーム以外の分解機構が関与している可能性が示唆された。
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