口腔癌におけるp53癌原性変異の臨床的意義:放射線感受性・抗癌剤感受性との関連

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15592131
• 研究機関: 獨協医科大学
• 研究代表者: 川又 均 獨協医科大学, 医学部, 助教授 (70224847)
• 研究分担者: 表原 文江 獨協医科大学, 医学部, 助手 (50337359)
• キーワード: 口腔癌 / p53 / 癌原性変異 / 抗癌剤感受性 / 放射線感受性

研究概要

本研究では癌細胞由来変異p53遺伝子の転写活性化能と癌抑制遺伝子としての機能の多様性を検索した.種々の頭頸部扁平上皮癌細胞よりRNAを抽出し,RT-PCRにてp53全翻訳領域を含むcDNAを合成後,哺乳動物細胞発現ベクター(pEGFP-C3)に挿入した.p53全塩基配列を決定すると,各癌細胞由来p53遺伝子変異は中央のコアドメインのみならずエキソン2からエキソン11の広範囲にわたって存在していた。各癌細胞由来のp53の標的遺伝子(BAX,MDM2,P21^<waf1>,PUMA,p53AIP1)に対する転写活性化をSaos-2細胞(p53遺伝子が欠失)を用いて検索した.変異型p53(Asn30Ser)は検索した全ての標的遺伝子に野生型とほぼ同様の転写活性化能を有したが,変異型p53(Glu17Lys,His193Leuあるいはdelta121)は全く転写活性化能を示さなかった。一方,変異型p53(Asp281His)は,BAX,MDM2に対しては転写活性化が認められなかったものの,PUMAに対しては野生型と同様の転写活性化能を有し,P21^<waf1>に対してはむしろ野生型よりも強い転写活性化能を有していた.さらに,この変異型p53(Asp281His)をSaos-2に導入したところ,アポトーシス誘導能が欠失していた.一方,変異型p53(Glu17Lys,His193Leu)は野生型にやや遅れて弱いながらアポトーシスを誘導した.これら2種類の変異型p53を導入したSaos-2細胞を抗癌剤で処理しDNA障害を与えると,これら変異p53は抗癌剤による細胞死を回避させた.現在のところ,そのメカニズムは不明であるが癌細胞に存在する変異p53は癌抑制遺伝子としての機能を喪失しているばかりか,DNA障害に際して積極的に細胞の生存を維持させるような機能を獲得した変異(癌原性変異:oncogenic mutation)が存在することが明らかになった.

研究成果

• [文献書誌] Shinagawa Y, Kawamata H., Omotehara F. et al.: "Evaluation of the chemosensitivity of head and neck cancer cells based on the diverse function of mutated-p53."International Journal of Oncology. 22・2. 383-389 (2003)
• [文献書誌] Uchida D, Omotehara F, Kawamata H. et al.: "Posttranscriptional regulation of TSC-22 (TGF-β-stimulated clone-22) gene by TGF-β1."Biochem.Biophy.Res.Commun.. 305・4. 846-854 (2003)
• [文献書誌] Omotehara F., Kawamata H.et al.: "Transcriptional activation of cyclin-dependent kinase inhibitor, p21waf1 gene by treatment with a differentiation inducing agent, vesnarinone in a human salivary gland cancer cell line."J Exp Glin Cancer Res. 22・1. 57-60 (2003)
• [文献書誌] Kawamata H., Furihata T., Omotehara F., et al.: "Identification of genes differentially expressed in a newly isolated human metastasizing esophageal cancer cell line, T.Tn-AT1, by cDNA microarray."Cancer Sci.. 94・8. 699-706 (2003)
• [文献書誌] Tachibana M., Kawamata H., Omotehara F., et al.: "RT-PCR amplification of RNA extracted from formalin-fixed, paraffin- embedded oral cancer sections : Analysis of p53 pathway."Anticancer Res.. 23・3C. 2891-2896 (2003)
• [文献書誌] Horiuchi H, Kawamata H, Omotehara F, et al.: "Negative Immunohistochemical staining of p53 protein does not always reflect wild type p53 gene in cancer cells."J Gastroenterol. 印刷中.
• [文献書誌] Kawamata H., Omotehara F., Fujimori T: "Recent Research Development in Biophysics & Biochemistry"Research Signpost(印刷中). (2003)