| 研究課題/領域番号 |
15609005
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
幹細胞生物学
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| 研究機関 | 東海大学 |
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研究代表者 |
増田 治史 東海大学, 医学部, 講師 (50278496)
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| 研究分担者 |
岩畔 英樹 東海大学, 医学部, 助手 (60366002)
玉木 哲朗 東海大学, 医学部, 助教授 (10217177)
浅原 孝之 東海大学, 医学部, 教授 (20246200)
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| 研究期間 (年度) |
2003 – 2004
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| キーワード | sk34細胞 / 血管再生 / 下肢虚血 / 血管内皮前駆細胞 |
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| 研究概要 |
ヒト成体血液組織由来血管内皮前駆細胞(Endothelial progenitor Cells=EPCs)の発見以来、治療的血管形成の概念に基づく虚血性疾患に対する本細胞移植治療法が臨床に応用された。一方、マウス下肢骨格筋組織より、筋芽細胞及びEPCsへのbipotentな分化能を持った筋肉組織特異的未分化血管内皮細胞(Sk34細胞)の存在が証明された。今回、虚血性疾患におけるSk34細胞移植療法の有効性を検討した。in vitro培養系においてSk34細胞のEPCsへの分化培養を行った。マウス下肢筋肉組織より酵素法にて単核球を採取し、CD45陰性かつCD34陽性細胞(sk34細胞)をFlow cytometryにて単離した。本細胞を10%FBS含有IMDM培地にて培養した。培養14日目よりアセチルLDL-DiIを取り込む内皮細胞様敷石状のコロニーが出現し、内皮細胞への分化が確認された。21日目にコロニー形成細胞は、血管内皮細胞特有の管空構造を形成した。in vivo虚血動物モデルに対するSk34細胞由来EPCsによる血管再生療法の有効性を検討した。GFP発現EGFP遺伝子改変マウスよりsk34細胞を採取し、Balbcヌードマウスの虚血下肢筋肉内に移植した。移植後28日目において、対照群では虚血下肢壊死の、移植群ではlimb salvageの比率高くなることが確認された。またレーザードップラー血流測定において、虚血下肢血流/健側下肢血流比は、移植群において0.7、対照群にて0.3であり移植群において血流の改善が認められた。また虚血下肢筋肉組織では、GFP陽性の内皮細胞及び筋肉細胞が認められ、血管内皮系のみならず筋肉細胞にも分化しうることが判明した。本研究により、筋肉組織特異的未分化血管内皮前駆細胞の虚血性疾患に対する移植療法の有用性が示された。
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