2003 年度実績報告書

水晶体培養細胞中のD-アミノ酸含有タンパク質及びストレス誘導タンパク質の解析

研究課題

研究課題/領域番号	15651095
研究機関	京都大学
研究代表者	藤井紀子京都大学, 原子炉実験所, 教授 (90199290)
研究分担者	齊藤毅京都大学, 原子炉実験所, 助手 (10274143)
キーワード	D-アミノ酸 / ラセミ化 / 異性化 / 水晶体
研究概要	目的:申請者らは最近、水晶体培養細胞の産生するタンパク質中にD-β-アスパラギン酸(D-β-Asp)が存在することを発見した。これまでに種々の代謝の緩慢な老化組織(水晶体、脳、皮膚、歯など)ではD-β-Aspが見いだされているが、分裂の盛んに行われている培養細胞中でのD-β-Aspを含むタンパク質の報告は全くない。本研究ではこのタンパク質を同定し、その生物化学的性質を研究することを目的とした。方法と結果:水晶体培養細胞NN1003Aを大量に培養し、タンパク質画分を抽出し、2次元電気泳動にかけ、以前我々の調製したD-β-Asp含有ペプチド特異抗体を用いてwestern blottingを行った。その結果、水晶体培養細胞NN1003A中に分子量50k DaのD-β-Asp含有タンパク質が発現していることが明らかとなった。現在、本タンパク質のゲル内酵素処理を行い、質量分析計によって、同定中である。従来の研究で、我々はタンパク質中でのD-β-Asp生成は酵素に依存せず、Asp残基が5員環イミドを形成し、これを介してラセミ化、異性化をするというメカニズムを明らかにした。本反応はAsp残基がイミド形成をしやすいか、しにくいかが、driving forceとなっている。Asp残基のイミド形成はAspの隣接残基がアラニン、グリシン、セリンのような立体障害の小さいアミノ酸の場合は起こりやすいので、この様なアミノ酸残基が隣に位置しているときはラセミ化、異性化が生じやすい環境といえる。そのような意味でD-β-Asp含有タンパク質の一次配列の決定は重要である。次年度は本D-β-Asp含有タンパク質の同定とラセミ化機構の解析を行う予定である。

研究成果

(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] 藤井紀子: "D-アミノ酸から見た老化の研究"化学と教育. 52. 10-13 (2004)
[文献書誌] Miura Y, Fujimoto N, Komatsu T, Tajima S, Kawada A, Saito T, Fujii N.: "Immunohistochemical study of chronological and photo-induced aging skins using the antibody raised agaist D-Aspartyl residue-containing peptide."J.Cutan.Pathol. 31. 51E-56E (2004)
[文献書誌] M.Fukushima, H.Tamate, N.Fujii, Y.Nakano: "Determination of metal-binding proteins in soft tissues of rock oyster by neutron activation analysis and particle induced X-ray emission."J.Radioanal.Nucl.Chem.. 257. 105-108 (2003)
[文献書誌] Noriko Fujii, Minori Awakura Larry Takemoto, Mitsushi Inomata, Takumi Takata, Norihiko Fujii, Takeshi Saito: "Characterization of αA-crystallin from high molecular weight aggregates in the normal human lens."Molecular Vision. 9. 315-322 (2003)
[文献書誌] Noriko Fujii, Takumi Takata, Tadashi Shimo-Oka, Shingo Tajima, Yoshiko Tanaka, Takeshi Saito: "Immunological detection of D-β-aspartate-containing protein in lens derived cell lines. Dawei Yang."Molecular Vision. 9. 200-204 (2003)
[文献書誌] SadaKane.Y., Yamazaki.T., Nakagomi.K., Akizawa.T., Fujii.N., Tanimura.T., Kaneda.M., Hatanaka.Y.: "Quantification of the isomerization of Asp residue in recombinant human aA-crystallin by reversed-phase HPLC"J.Pharm.Biomed.Anal.. 30. 1825-1833 (2003)

2003 年度 実績報告書

水晶体培養細胞中のD-アミノ酸含有タンパク質及びストレス誘導タンパク質の解析

研究代表者

藤井 紀子 京都大学, 原子炉実験所, 教授 (90199290)

研究成果

[文献書誌] 藤井紀子: "D-アミノ酸から見た老化の研究"化学と教育. 52. 10-13 (2004)

[文献書誌] Miura Y, Fujimoto N, Komatsu T, Tajima S, Kawada A, Saito T, Fujii N.: "Immunohistochemical study of chronological and photo-induced aging skins using the antibody raised agaist D-Aspartyl residue-containing peptide."J.Cutan.Pathol. 31. 51E-56E (2004)

[文献書誌] M.Fukushima, H.Tamate, N.Fujii, Y.Nakano: "Determination of metal-binding proteins in soft tissues of rock oyster by neutron activation analysis and particle induced X-ray emission."J.Radioanal.Nucl.Chem.. 257. 105-108 (2003)

[文献書誌] Noriko Fujii, Minori Awakura Larry Takemoto, Mitsushi Inomata, Takumi Takata, Norihiko Fujii, Takeshi Saito: "Characterization of αA-crystallin from high molecular weight aggregates in the normal human lens."Molecular Vision. 9. 315-322 (2003)

[文献書誌] Noriko Fujii, Takumi Takata, Tadashi Shimo-Oka, Shingo Tajima, Yoshiko Tanaka, Takeshi Saito: "Immunological detection of D-β-aspartate-containing protein in lens derived cell lines. Dawei Yang."Molecular Vision. 9. 200-204 (2003)

[文献書誌] SadaKane.Y., Yamazaki.T., Nakagomi.K., Akizawa.T., Fujii.N., Tanimura.T., Kaneda.M., Hatanaka.Y.: "Quantification of the isomerization of Asp residue in recombinant human aA-crystallin by reversed-phase HPLC"J.Pharm.Biomed.Anal.. 30. 1825-1833 (2003)

2003 年度実績報告書

藤井紀子京都大学, 原子炉実験所, 教授 (90199290)