| 研究概要 |
1)小胞形成に伴う膜形態変化のリアルタイム観察
超高速共焦点レーザー顕微鏡下で、蛍光脂質でRhodamineラベルしたphosphatidylethanolamineを含む単層大型のリポソームを脳細胞質、ATP, GTPと反応させ、小胞形成のライブイメージを観察した。その結果、リポソーム表面からの突起形成と、形成された突起の凝集によると思われる蛍光ラベルの凝集がリポソーム表面で観察された。また、同様に蛍光ラベルした単層大型のリポソームを、牛脳より精製したdynaminおよび大腸菌で発現精製したAmphiphysinと反応させることにより、明瞭なチューブ状突起の形成が観察された。
2)Amphiphysinの機能解析
小胞形成に関与するAmphiphysin 1について、ノックアウトマウスの脳細胞質や、大腸菌で発現精製したAmphiphysin 1を用いて機能解析を行った。その結果Amphiphysin 1がDynamin 1の膜への結合とGTPアーゼ活性を増強して、小胞形成を増加させることを明らかにした。この効果にはAmphiphysin 1のBARドメインとSH3ドメインが必要であることをtruncation mutantを用いて明らかにした。またAmphiphysin 1のDynaminGTPアーゼ活性を増強効果には単層大型のリポゾームの存在が必要であった。以上より、Amphiphysin 1がDynaminを調節し、小胞形成を行う機構を提唱した。
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