白血病とウイルス特異的不死化細胞傷害性T細胞の細胞バンク化に向けての基礎研究

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15659229
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 安川 正貴 愛媛大学, 医学部, 助教授 (60127917)
• 研究分担者: 薬師神 芳洋 愛媛大学, 医学部, 助手 (30294797) ; 酒井 郁也 愛媛大学, 医学部, 助手 (10205700)
• キーワード: 白血病 / ウイルス感染症 / 免疫療法 / WT1 / 遺伝子治療 / T細胞レセプター / 細胞傷害性T細胞

研究概要

白血病と難治性ウイルス感染症に対する普遍的細胞傷害性T細胞(CTL)養子免疫療法の開発の目的で、特定の特異性とHLA拘束性を有するCTLを大量に供給できる2つのシステムを考案した。
1)われわれは、Herpesvirus saimiri (HVS)がヒトT細胞を本来の免疫学的機能を維持したまま不死化させることを報告した。このような不死化CTLクローンに自殺遺伝子を導入し、必要時人為的に患者体内から排除することによってその安全性はさらに増すと考えられる。そこで本研究では、その基礎実験として、白血病特異的CD8陽性CTLをHVSで不死化し、単純ヘルペスウイルスthymidine kinase遺伝子を導入した。その結果、HVS不死化CTLは特異的細胞傷害性を維持したままIL-2依存性に増殖を続けた。さらに、これらのCTLクローンはガンシクロビル添加によって短期間にほとんど全て死滅することが確認された。
2)われわれが樹立したWT1ペプチド特異的HLA-A24拘束性CTLクローンTAK-1はWT1由来ペフチドとHLA-A24複合体に高い結合性を有し、極めて効率的にWT1発現腫瘍細胞を傷害する。そこで、TAK-1からT細胞レセプター(TCR)α鎖およびβ鎖遺伝子をクローニングし、レンチウイルスベクターを用いて正常CD4およびCD8陽性T細胞に遺伝子導入した。導入後2回のペプチド抗原刺激を加えたところ、TAK-1由来TCR発現効率は70〜80%と高率であった。TCR遺伝子導入細胞は親株のTAK-1同様にWT1発現腫瘍細胞をHLA-A24拘束性に傷害することが示された。また。TCR遺伝子導入CD4陽性T細胞は、HLA-A24陽性、HLAクラスII発現白血病細胞に対して細胞傷害性とTh1サイトカイン産生を示した。
このような方法を用いることによって将来はCTLのバンク化を図り、普遍的なCTL養子免疫療法が可能になると考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Yamanouchi, J., Yasukawa, M., et al.: "Identification of an epitope on glycoprotein IIb-IIIa that is recognized by HLA-DRB1*0405-restricted CD4^+ T cells from a patient with ITP"J.Thromb.Haemostasis. (In press). (2004)
• [文献書誌] Yanai, F., Yasukawa, M., et al.: "Essential roles of perforin in antigen-specific cytotoxicity mediated by human CD4^+ T lymphocytes : analysis using the combination of hereditary perforin-deficient effector cells and Fas-Deficient target cells"J.Immunol.. 170. 2205-2213 (2003)
• [文献書誌] Oka, Y., Yasukawa, M., et al.: "Wilms tumor gene peptide-based immunotherapy for patients with overt leukemia from myelodysplastic syndrome (MDS) or MDS with myelofibrosis."Int J Hematol.. 78. 56-61 (2003)
• [文献書誌] Takahashi T., Yasukawa.M., et al.: "Valpha24+ natural killer T-cell responses against T-acute lymphoblastic leukaemia cells : implications for immunotherapy"Br.J.Haematol.. 122. 231-239 (2003)
• [文献書誌] Hamada, M., Yasukawa, M., et al.: "Aurora2/BTAK/STK15 is involved in cell-cycle checkpoint and cell survival of aggressive non-Hodgkin's lymphoma."Br.J.Haematol.. 121. 439-447 (2003)