| 研究概要 |
昨年度に引き続き、神経幹細胞、血液幹細胞から精子形成細胞への分化誘導の試みををまずin vitro実験で行った。神経幹細胞を脳線条体および海馬組織より血液幹細胞を骨髄組織より採取した。胎仔精巣からSertoli細胞およびLeydig細胞から採取し、神経幹細胞と血液幹細胞とマトリゲル内で共培養を行った。そこに、増殖因子であるEGF, bFGF, KGFを加えて行ったが変化を認めなかった。そこでトランスフェリン、androgen binding protein、アクチビン、インヒビンを様々な濃度で追加投与したが、全く変化は起きず、精子形成細胞への分化誘導はin vitroでは失敗に終わった。in vitroでの分化誘導には限界があり、その条件設定を詳しく検討する必要があると思われた。
そこで、実際に精巣内へ移植することより、分化誘導が可能かどうかを検討した。8週齢オスマウスにブズルファンを投与し、精子形成細胞を除去した男子不妊症マウスを作製した。上記により得た神経幹細胞および血液幹細胞を1x10^6細胞を精巣網から微小ガラス管をもちいて注入し、注入後7日、14日、28日後に精巣を取り出し、精細管内の変化を光学顕微鏡により観察した。注入後7日の精巣において、精細管内に生殖細胞用の細胞が散在することを確認したが、これが神経幹細胞や血液幹細胞由来のものかどうかは確認できていない。今後これらをとりだし、精子形成細胞特異的なマーカーにより、精子形成細胞か否かを検討する予定である。
|
