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エストロゲンはP450(CYP)分子種の一つ、アロマターゼ(CYP19)によって生合成される。オスでは、精巣から分泌されたテストステロンが脳のアロマターゼでエストロゲンに変換され、脳がエストロゲンによってインプリンティングされ、性成熟後に性行動がオス化する。メスでは、この時期に体幹でエストロゲンがトラップされるため、エストロゲンは脳へは運ばれないことも分かっており、脳内アロマターゼは「エストロゲンの産生→インプリンティング→成熟後の正常な性行動・性ホルモン分泌」を決定付ける重要な酵素である。そこで、この時期のimprintingへの影響をin vivoでスクリーニングする系を確立するため、トランスジェニックラットを作製した。
バックグラウンドの低下やin vivo可視化のために、最終的にBRE単純繰り返し配列の連結クローンにレポーター遺伝子を組み込んだカセットを作成した。レポーター遺伝子としてlacZとルシフェラーゼを組み込んだカセットを作製した。視床下部より初代培養細胞を得、前述のレポーターカセットをトランスフェクションして、バックグラウンドについて調べた。トランスジェニックラット作製のために、バックグラウンドの低いルシフェラーゼをレポーターとして選択した。
ERE-ルシフェラーゼカセットを制限酵素で切断し、得られたDNAフラグメントを卵400個へ導入し、14匹のfounderラットを得た。14匹のfounderラットからF1を作製し、約300匹のラットについてgenotypingを行った。得られたトランスジェニックラットにDESを曝露し、レポーターシグナルの誘導について調べ、phenotypingを行った。
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