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本研究の目的は、近年、蛋白質の構造解析に最も重要かつ効果的な手段の一つとなったナノ高速液体クロマトグラフと組み合わせた質量分析法を用い、神経機能において情報伝達やネットワーク形成、神経伝達の可塑性に重要な役割を果たす神経シナプス結合部のシグナル伝達の未知の分子機構を解明するため、申請者が既に同定した集積蛋白質の分子間相互作用、翻訳後修飾解析による機能解析、またプレシナプス終末構成タンパク質の同定と、シナプスを介するシグナル伝達に関わる新規因子の探索を目的としたものである。本年度は、昨年度質量分析を用いて同定された前シナプス、シナプスを形成する前段階である成長円錐の新規な複数の機能未知タンパク質について、昨年に引き続き大腸菌を用いたリコンビナントタンパク質の発現系の構築を行い、目的タンパク質の大量精製を行った。またこれを抗原に用い、特異的な抗体作製を行った。また、哺乳類細胞発現用タグ付タンパク質発現ベクターの構築、作製を行い、蛍光免疫染色により神経様培養細胞を用い、突起伸張過程における細胞内局在の解析を行った。また、抗体が作成できたものに関しては、抗体免疫染色を行った。作成した一部については特異的な突起先端部の発現が見られ、新規な成長円錐たんぱく質であることが示唆された。
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