新しい血液凝固制御因子ADAMTS-13の構造と機能に関する研究

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15770093
• 研究機関: 国立循環器病センター研究所
• 研究代表者: 小亀 浩市 国立循環器病センター研究所, 脈管生理部, 室長 (40270730)
• キーワード: 血液 / 凝固因子 / 血小板 / ADAMTS-13 / フォンビルブランド因子 / 血栓性血小板減少性紫斑病 / 蛋白質分解 / 酵素

研究概要

ADAMTS-13は、フォンビルブランド因子(VWF)を切断することでその血小板凝集能を調節する。ADAMTS-13活性の欠損は血栓性血小板減少性紫斑病(TTP)を引き起こす。本研究は、ADAMTS-13の構造と機能を解析し、臨床的に役立つ知見を得ることを目的とする。【生化学的解析】ヒトADAMTS-13および種々の変異体を培養細胞で発現させた結果、TTP患者に見られる変異の多くは分泌不全を示した。また、酵素活性の発現に必須な領域が明らかになった。【活性測定法の開発】ADAMTS-13の特異的基質として機能する最短ペプチドを利用して、従来法より簡便な活性測定法を確立した。【VWF切断部位認識抗体の作製】ADAMTS-13で切断されたVWFのC末端断片のN末端を特異的に認識するモノクローナル抗体の作製を試みたが、目的のクローンは得られなかった。現在、N末端断片のC末端に対する抗体の作製を進めている。【多型の頻度調査】ADAMTS-13のP475S多型は酵素活性の低下をもたらす。TaqManシステムを構築し、地域一般住民を調査した結果、約1割に本多型が見出された。この多型は西洋人で見出されず、日本あるいはアジア特有であることが示唆された。本解析は倫理委員会の承認のもとで行った。【マウスAdamts13遺伝子の解析】マウスAdamts13の塩基配列を決定した結果、多くの系統において第23イントロンにレトロトランスポゾン配列が挿入しており、そのためにC末端領域が欠失した酵素が発現していることが見出された。作製中のノックアウトマウスとあわせ、ADAMTS-13の生理機能を解析する有用なモデル動物となる。

研究成果

• [文献書誌] Kenji Soejima: "ADAMTS-13 cysteine-rich/spacer domains are functionally essential for von Willebrand factor cleavage."Blood. 102(9). 3232-3237 (2003)
• [文献書誌] Xiaorei Sai: "The ubiquitin-like domain of Herp is involved in Herp degradation, but not necessary for its enhancement of amyloid β-protein generation."FEBS Lett.. 553(1-2). 151-156 (2003)
• [文献書誌] Koichi Kokame: "VWF73, a region from D1596 to R1668 of von Willebrand factor, provides a minimal substrate for ADAMTS-13."Blood. 103(2). 607-612 (2004)
• [文献書誌] Masanori Matsumoto: "Molecular characterization of ADAMTS13 gene mutations in Japanese patients with Upshaw-Schulman syndrome."Blood. 103(4). 1305-1310 (2004)
• [文献書誌] Koichi Kokame: "Genetic defects leading to hereditary thrombotic thrombocytopenic purpura."Semin.Hematol.. 41(1). 34-40 (2004)
• [文献書誌] Tomohiko Okuda: "Ndrg1-deficient mice exhibit progressive demyelinating disorder of peripheral nerves."Mol.Cell.Biol.. in press.