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正常マウス線維芽細胞株とCsk欠損線維芽細胞株において、Src基質であるCortactinをGFP融合蛋白質として発現させ、その局在をタイムラプス観察した。Cortactinはこれまでにもラメリポディア先端の細胞膜直下やアクチン線維に沿って局在することが観察されていたが、これまでの観察同様にここでも伸展中のラメリポディア先端部に強く局在することが観察された。また半円形に広がった大きめのラメリポディアの中心部では、細胞膜直下への局在とは別のリングの様に連なった斑点状の局在を示すことが観察された。この局在は以前から固定した細胞での免疫染色でも観察されており、ポドソーム様構造と捉えられていたものだと思われる。今回タイムラプス観察したことで、このリング状局在がダイナミックに変化するCortactin局在の一時的な姿であり、この動的な局在変化が細胞の接着斑形成と関連するものである結果が観察された。またCsk欠損細胞で観察されるCortactin集積点が、このリング状構造の最終状態が固定されて出来るものである可能性が示された。
これらの結果から、Srcファミリーキナーゼの活性調節によるCortactinのリン酸化・脱リン酸化反応が細胞接着時の接着斑の形態や維持の調節に重要な役割を果たしている可能性が示された。今後、この可能性を検証するために、Cortactin欠損細胞株の樹立やCortactinリン酸化状態の変化をリアルタイム観察するためのFRETプローブの作製を行い、これらを用いることにより生きた細胞でのリン酸化Cortactinの局在を観察することが重要な意義を持つと考えている。
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