フラビウイルスの節足動物細胞における感染・増殖機構に関する分子基盤の解明

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15780196
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 早坂 大輔 長崎大学, 熱帯医学研究所, 助手 (10346926)
• キーワード: ダニ媒介性脳炎ウイルス / レプリコン / GFP / 持続感染細胞

研究概要

ダニ媒介性脳炎ウイルス(TBEV)のレプリコンを作製した。
感染性cDNAクローンを用いてTBEVの構造蛋白(核蛋白、膜蛋白およびエンベロープ蛋白)の大部分を欠損させ、Baby hamster kidoney(BHK)細胞にトランスフェクションしウイルス蛋白の発現、ウイルスRNAの複製を確認した。
次いで、TBEVレプリコンへ外来性遺伝子としてGreen Fluorescent protein(GFP)遺伝子を導入しその発現を確認した。さらに、細胞内において持続的にレプリコンが発現する系を作製するために、Neo遺伝子を導入しジェネティシンによりレプリコン持続感染細胞を選択した。
本研究で作製されたレプリコンを用いることにより、蚊媒介性およびダニ媒介性脳炎ウイルスのキメラウイルスの作製、ダニ細胞でのレプリコン持続細胞の作製などが可能となった。

研究成果

• [文献書誌] Goto A, Hayasaka D, et al.: "A BHK-21 cell culture-adapted tick-borne encephalitis virus mutant is attenuated for neuroinvasiveness"Vaccine. 21・25-26. 4043-4051 (2003)
• [文献書誌] Miyamoto H, et al.: "Serological analysis of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) patients in Far Eastern Russia and identification of the causative hantavirus genotype"Archives of Virology. 148・8. 1543-1556 (2003)
• [文献書誌] Yoshii K, Hayasaka D, et al.: "Enzyme-linked immunosorbent assay using recombinant antigens expressed in mammalian cells for serodiagnosis of tick-borne encephalitis"Journal of Virological Methods. 108・2. 171-179 (2003)