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1.TGase修飾タンパク質を特異的に認識するモノクローナル抗体の作製
生体内でのTGaseによるタンパク質分子間架橋形成を検出するためにTGase修飾タンパク質(TGase基質タンパク質)を特異的に認識するモノクローナル抗体を作製した。ブタ肝臓より精製したBHMTをフロイント完全・不完全アジュバントを用いてBalb/cマウスに免疫した。脾細胞を調製しSp2ミエローマ細胞と細胞融合し、ハイブリドーマを作製した。ELISAによるスクリーニングでBHMTに特異性の高い抗体を産生するU35-21株を取得した。ウェスタンブロッティングによる解析の結果、ブタ、マウス、ラット肝臓組織抽出液中のBHMTを高感度で検出できることが可能であった。
2.老化モデル実験動物を用いたTGase、BHMT活性変動とHcy濃度の因果関係の検証
TGaseの基質として同定されたBHMTはホモシステイン(Hcy)代謝に関与することから、動脈硬化、アルツハイマー病などの加齢疾患のリスクファクターである血中Hcy濃度とTGaseによるBHMT架橋修飾との因果関係を明らかにするため、Std:ddYマウスを長期間飼育し血漿、肝臓組織サンプルを採取した。現在、血漿Hcy濃度、肝臓組織中TGase、BHMTの発現量および酵素活性等を若齢マウスと比較検討している。
3.酵母Two-hybrid法によるTGase相互作用タンパク質の検索・同定
CytoTrap酵母Two-Hybridシステムを用いてマウス肝TGaseと相互作用するタンパク質をマウス肝cDNAライブラリーからスクリーニングし、38クローンの相互作用候補を得た。この38クローンの塩基配列解析を行った結果、酵素タンパク質、プロテアーゼインヒビター、各種構造タンパク質など様々なタンパク質が含まれていた。現在、38クローンのTGaseとの相互作用の再確認を行っている。
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