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DNAメチル化をはじめとするエピジェネティックな情報は、哺乳類の発生に必須である。様々なゲノム領域が、発生の時期や細胞系列特異的な、または疾患特異的な修飾を受けていることが明らかになりつつあるが、DNAメチル化の特異性がどのような機構で制御されているのか、その詳細は未だに明らかではない。本研究では、成熟過程の卵細胞におけるインプリンティング遺伝子のDNAメチル化制御機構の詳細を調べ、DNAメチル化制御機構のモデルを構築することを目標とする。本年度は、以下の成果を上げた。1)おとりとなるタンパク質を、酵母内で安定して発現させる系を確立した。公的データベースに登録されているおとりタンパク質のcDNA配列には、一部欠失が存在していることが判明した。おそらくこのためにタンパク質が分解されやすい構造になると考えられた。この予想外の欠失配列の存在のため、当初の予定よりおとりタンパク質発現ベクターの作成に時間がかかった。2)おとりタンパク質と候補タンパク質の相互作用をin vitroで検討するための発現ベクターを作成した。3)成熟過程の卵母細胞を用手的に回収する手技を確立した。この手法により、数百個の卵母細胞からすでにmRNAを回収し、現在ライブラリー化を行っている。4)生殖細胞特異的に蛍光タンパク質を発現するマウスを用い、FACSを用いて卵母細胞を効率的に回収する系を検討したが、目的の細胞群の直径が大きく、FACSの仕様上ソーティングが困難であることがわかった。
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