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遺伝子治療における導入遺伝子の発現を非侵襲的に評価する方法の開発を目的として、心臓移植をモデルとし、移植心に免疫抑制遺伝子を導入し、その免疫抑制遺伝子の発現レベルを非侵襲的にイメージングすることを計画した。本年度は、治療遺伝子として免疫抑制サイトカインであるvirus interleukin-10 (vIL-10)とレポーター遺伝子としてdopamine D2 receptor (D2R)を同時に発現するベクターの構築および構築したベクターのインビトロ実験系での評価を行った。まず、vIL-10及びD2Rを同時に発現するベクターの構築は、vIL-10とP2Rの遺伝子の間にcap構造非依存的にタンパク翻訳出来るinternal ribosome entry site (IRES)の遺伝子配列を挿入しすることにより発現ベクターを構築した。さらに、臨床への応用を考え、D2Rのシグナル伝達がおこらないようした変異型D2Rを導入したベクターの構築も行った。構築してベクターをHEK293細胞に導入し、安定発現株を樹立し、インビトロ実験系における検討を行った。その結果、vIL-10が細胞培養液中に分泌されること、変異型D2Rが細胞膜に発現していることが確認できた。さらに、変異型D2Rではシグナル伝達が抑制されていること、D2Rの放射性リガンドに対して結合能を保持していることが確認できた。以上の検討により、構築した発現ベクターと放射性薬剤を用いることにより、核医学的手法により、導入遺伝子の発現をイメージングできる可能性が示された。
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