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脳虚血モデルの確立
マウス脳虚血モデル作成に顕微鏡下での総頸動脈結紮法を行うための解剖学的考祭を行った。今後効率良いモデル作成に総頚動脈結紮法が適切であるかを試験的に手術を行い検証する。
低酸素誘導因子とニューログロビンの発現解析
低酸素誘導因子とニューログロビンの発現をノザンハイブリダイゼーションで解析するためのプローブ作成に関し、RT-PCRで増幅するためのプライマーの設計検討まで行った。今後プライマーの合成、増幅したcDNAのサブクローニングを行い、ノザンハイブリダイゼーションにより発現を解析する(組換えDNA実験申請中)。インシチュハイブリダイゼーションによる解析は標本の準備が困難であり、ノザンハイブリダイゼーシヨンによる解析を優先することとした。脳虚血モデルマウス確立後、虚血前後の発現変化を確認する。
また低酸素誘導因子とニューログロビンの発現状態をタンパクのレベルで解析するための抗体に関して、実験計画当初は市販されていなかったため、抗体作製を外注する予定であったが、ニューログロビンはテキサスサウスウエスタンメディカルセンターのprogram for genomic applicationsにて作製配布された。また低酸素誘導因子も複数の会社より市販されたので、試験的に使用し良好な結果であればウエスタンブロットでの解析を行う(虚血前後の変化)。
さらに総頸動脈結紮法だけでなく低濃度酸素への曝露による虚血モデルでも実験し、発現量の変化を解析したい。
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