新規ファンコニ貧血遺伝子のハンティングと機能解析

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15H01738
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 高田 穣 京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (30281728)
• 研究分担者: 佐藤 浩一 早稲田大学, 理工学術院, 講師 (60708585) ; 石合 正道 京都大学, 放射線生物研究センター, 准教授 (90298844)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: ファンコニ貧血 / 相同組換え / 先天性骨髄不全

研究実績の概要

１．日本人分類不能FA症例9例のサンプル解析。分類不能FA症例9例は、様々な努力によっても既知のFA原因遺伝子の変異による発症が確定出来なかった症例である。細胞の入手可能であった3例においてRNAseqを行い、現在解析を行っている。また、FAAP20の変異を認めた例からの細胞にFAAP20をレンチウイルスによって導入した。FANCI、FANCMのヘテロ変異を認めた例に対応する遺伝子を導入した。現在発現の確認と相補の有無をテストしている。

２．インド人FA患者サンプルの解析による新規FA遺伝子ハンティング。二国間交流事業によってインド、ムンバイを訪問し、サンプルの輸送について相談し同意を得た。しかし、インド政府の認可がおりず、年度内にサンプルの輸送を行えなかった。やっと認可が出たので、サンプル輸送を開始する。

３．同定された新規FA蛋白質機能の詳細な解析。研究分担者の佐藤博士（早稲田大学胡桃坂研究室）によって変異型UBE2Tのインビトロ酵素活性低下と、FANCLとの会合の低下が確定した。また、ゼブラフィッシュFAモデルの作成と解析。UBE2Tのノックアウトゼブラフィッシュを作成については、ヘテロ変異をもつ個体を得る事に成功し、現在ホモ個体を得るべく掛け合わせを行っている。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

日本人患者の解析は順調に推移しているが、インド人患者の解析は遅れている。これは、インドからのサンプル送付や研究打ち合わせのための来日などが、インド政府が認可せず、H27年度内にほとんど進める事が出来なかったためである。ようやく認可が出たので、サンプルの輸送が開始でき、今後の進展は期待できる。

今後の研究の推進方策

インドの症例の解析を効率良く進めるため、細胞株の作成を試みる。EBVのトランスフォーメーション法が簡便でよいと考え、オランダ、米国のグループからプロトコールと必要なEBVのソース細胞（B95-8)を入手した。これにより、変異をみとめた遺伝子による相補が簡便に行えることが期待できる。

研究成果

• [国際共同研究] Nantional Institute of Immunohaematology(India)
  • 国名: インド
  • 外国機関名: Nantional Institute of Immunohaematology
• [雑誌論文] Human FAN1 promotes strand incision in 5'-flapped DNA complexed with RPA. (2015)
  • 著者名/発表者名: Takahashi D, Sato K, Hirayama E, Takata M, Kurumizaka H.
  • 雑誌名: J Biochem. 巻: 158 ページ: 263-70
  • DOI: 10.1093/jb/mvv043
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pluripotent cell models of fanconi anemia identify the early pathological defect in human hemoangiogenic progenitors. (2015)
  • 著者名/発表者名: Suzuki NM, Niwa A, Yabe M, Hira A, Okada C, Amano N, Watanabe A, Watanabe K, Heike T, Takata M, Nakahata T, Saito MK.
  • 雑誌名: Stem Cells Transl Med. 巻: 4 ページ: 333-8
  • DOI: 10.5966/sctm.2013-0172
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Mutations in the Gene Encoding the E2 Conjugating Enzyme UBE2T Cause Fanconi Anemia. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hira A, Yoshida K, Sato K, Okuno Y, Shiraishi Y, Chiba K, Tanaka H, Miyano S, Shimamoto A, Tahara H, Ito E, Kojima S, Kurumizaka H, Ogawa S, Takata M, Yabe H, Yabe M.
  • 雑誌名: Am J Hum Genet. 巻: 96 ページ: 1001-7
  • DOI: 10.1016/j.ajhg.2015.04.022.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Third Report on Chicken Genes and Chromosomes 2015. (2015)
  • 著者名/発表者名: Michael Schmid, Minoru Takata et al.
  • 雑誌名: Cytogenetic and Genome Research 巻: 145 ページ: 78-179
  • DOI: 10.1159/000430927
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Conserved overlapping gene arrangement, restricted expression and biochemical activities of DNA polymerase ν; (POLN). (2015)
  • 著者名/発表者名: Takata KI, Tomida J, Reh S, Swanhart LM, Takata M, Hukriede NA, Wood RD.
  • 雑誌名: J Biol Chem. 巻: 290 ページ: 24278-93
  • DOI: 10.1074/jbc.M115.677419
  • 査読あり / 国際共著
• [学会発表] 相同組換えにおけるＲＰＡ２のユビキチン化を介した分解 (2015)
  • 著者名/発表者名: 稲野将二郎、佐藤浩一、石合正道、勝木陽子、中田慎一郎、胡桃坂仁志、高田 穣
  • 学会等名: BMB2015
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
  • 招待講演
• [学会発表] 複製ストレスによるFANCD2集積部位のゲノムワイド解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 石合正道、岩嵜航、高橋数冴、久郷和人、小田有沙、大木千夏、福井哲也、河合秀彦、山本卓、太田邦史、印南秀樹、高田穣
  • 学会等名: BMB2015
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
  • 招待講演
• [学会発表] UBE2T/FANCT is a novel FA gene identified in Japanese Fanconi anemia patients. (2015)
  • 著者名/発表者名: Minoru Takata, Asuka Hira, Kenichi Yoshida, Koichi Sato, Akira Shimamoto, Hitoshi Kurumizaka, Seishi Ogawa, Hiromasa Yabe, and Miharu Yabe.
  • 学会等名: The 16th Ataxia-Teleangiectasia Workshop.
  • 発表場所: Beijing China
  • 年月日: 2015-10-11 – 2015-10-14
  • 国際学会
• [学会発表] ファンコニ貧血と遺伝性乳がん卵巣がん：相同組換え欠損を基盤とした高発がん症候群 (2015)
  • 著者名/発表者名: 高田 穰
  • 学会等名: 第74回日本癌学会 学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場
  • 年月日: 2015-10-08 – 2015-10-10
  • 招待講演
• [学会発表] DNA damage and repair in Fanconi anemia (2015)
  • 著者名/発表者名: Minoru Takata
  • 学会等名: 第２回IFOM－京都大学合同シンポジウム
  • 発表場所: 京都大学紫蘭会館稲森ホール
  • 年月日: 2015-10-06 – 2015-10-07
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] Mutations in the gene encoding the E2 conjugating enzyme UBE2T cause Fanconi anemia. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hira, K. Yoshida, K.Sato, Y. Shiraishi, K. Chiba, H. Tanaka, S. Miyano, A. Shimamoto, H.Tahara, E.Ito, S.Kojima, H. Kurumizaka, S.Ogawa, M.Takata, H.Yabe, M. Yabe.
  • 学会等名: 27th Annual Fanconi anemia research fund Scientific Symposium.
  • 発表場所: Tronto, Canada
  • 年月日: 2015-09-17 – 2015-09-20
  • 国際学会
• [学会発表] Identification of UBE2T as a novel Fanconi anemia gene. (2015)
  • 著者名/発表者名: Asuka Hira, Kenichi Yoshida, Koichi Sato, Akita Shimamoto, Hidetoshi Tahara, Hitoshi Kurumizaka, Seishi Ogawa, Minoru Takata, Hiromasa Yabe, Miharu Yabe.
  • 学会等名: ICRR2015
  • 発表場所: Kyoto 国際会館
  • 年月日: 2015-05-25 – 2015-05-29
  • 国際学会
• [図書] DNA Replication, Recombination, and Repair (2015)
  • 著者名/発表者名: Masamichi Ishiai, Junya Tomida, Akiko Itaya, James Hejna, Minoru Takata.
  • 総ページ数: 35
  • 出版者: Springer Japan
• [備考] 研究成果アーカイブ
  • URL: http://house.rbc.kyoto-u.ac.jp/research