|
本研究で開発した、PNAをプローブとして、ヒトゲノムから所定断片を効率的かつ高純度に抽出するアフィニティー分離系の改良に取り組んだ。昨年度に得られたPNA/DNA複合体形成、安定性の基礎的データをもとに様々な条件を検討したが、残念ながら従来系を超える系の構築には至らなかった。一方で、昨年度の解析では、通常は2本のPNAを使用してPNA/DNA複合体を形成させるが、配列に依存するものの、1本のPNAのみでも分離可能なことが見いだされていた。そこで、1本のPNAのみ使用した複合体形成について解析を行ったところ、PNA中に修飾塩基を導入することが必須であることが明らかとなった。これをアフィニティー分離系に応用できれば、系の低コスト化、簡便化につながると期待される。
本研究の目的である”分子情報に基づくニュー・ゲノム科学”の構築を目指し、開発したアフィニティー分離系を用いて抽出した分離断片の分子情報の解析も行った。ヒトゲノムから所定断片をアフィニティー分離し、溶出させずビーズに固定化した状態のまま核抽出液と反応させることで、所定断片に結合するタンパク質画分を得た。得られたタンパク質画分をウエスタン解析や質量分析することにより、今後精査する必要はあるが、結合タンパク質の一部を同定することができた。本系の構築は、ゲノムの所定の領域に結合するタンパク質因子を明らかにし、ゲノム機能の全容解明に寄与するものである。
|
