| 研究実績の概要 |
腎臓特異的スキャホールド、支持スキャホールドであるTGP組成の適正化により、iPS細胞から３次元人工腎臓の作出が可能か検証する。27年度ではマウスを用い、I)界面活性剤還流による、腎臓特異的スキャホールドの作成、II)マウスiPS細胞から腎臓前駆細胞の分化誘導、III) 支持スキャホールドとしてのTGP組成の適正化による腎臓構成細胞の腎臓特異的スキャホールドへの生着を検証する。28年度以降ではIV)作出した３次元人工腎臓の機能評価をバイオリアクター内での器官培養および尿組成で評価する。マウスでの作出条件が適正化されたら、次にヒトiPS細胞および免疫不全ブタを用い、マウスと同様の手法で臨床応用可能な、３次元人工腎臓をを検討する。腎臓特異的スキャホールドの作成(Nature Medicine 2013)およびiPS細胞から腎臓前駆細胞の分化誘導(Cell Stem Cell, 2014)は既報のプロトコールに従い、TGP組成の適正化は既に作成すみの細胞接着因子を負荷した15種類のS-TGPを用いる。
I. マウス腎臓を用いた腎臓特異的スキャホールドの作成
概要：既報(Nature Medicine 2013)に従い、マウス腎臓を界面活性剤である1%SDSおよび1% tritonXで還流することにより、細胞成分を完全に除去し、スキャホールドのみを残す。1)マウス腎臓を取り出し、ヘパリン加PBSを用い、30mmHgで１５分還流し、十分脱血液する 2)1% SDSを用い、30mmHgで12時間還後、30分間1% triton Xで還流する 3)抗生剤入りのPBSを用い、96時間30mmHgで細胞成分を取り除いた腎臓を還流する
II. マウスiPS細胞から腎臓構成細胞への分化誘導
概要：既報(Cell Stem Cell,2014)に従い、マウスiPS細胞を各種増殖因子等で処理し、最終的にマウス胎児脊髄と共培養することにより、腎臓前駆細胞から腎臓構成細胞へと分化誘導する。
I, IIより、マウスでのスキャホールドおよび腎臓構成細胞への分化誘導が達成された。
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