| 研究課題/領域番号 |
15H03110
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
大利 徹 北海道大学, 工学(系)研究科(研究院), 教授 (70264679)
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| 研究分担者 |
濱野 吉十 福井県立大学, 生物資源学部, 教授 (50372834)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | シュードトリペプチド / カルボニルメチレン / ATP-grasp / 放線菌 |
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| 研究実績の概要 |
１、3株の放線菌ゲノムに見出された、ペプチドのアミノ基を求核剤に用いてアミドを形成する新規ペプチドリガーゼ相同遺伝子の機能解析を行った。個々に特異的な遺伝子クラスターをStreptomyces lividansで異種発現させた結果、3株由来の何れのクラスター導入株もカルボニルメチレン構造を有する新規なシュードトリペプチド（ketomemicin類）を生産した。
２、1株由来のペプチドリガーゼ相同遺伝子を組換え酵素を用いて解析した結果、アミジノアルギニンのカルボニル末端に（シュード）ジペプチドを結合させる反応を触媒する、ジペプチドリガーゼであることを明らかにした。
３、カルボニルメチレン構造の生合成に関与すると推定される4つの酵素を可溶性の組換え酵素として発現させ、in vitro解析を開始した。
４、上記リガーゼのN-末基質にアミジノ基を導入する酵素を組換え酵素を用いて諸性質を検討した。
５、上記3株に加え、相同遺伝子を含むクラスター構造が異なる株を用いて、（１）同様の手法で解析を開始した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
計画した3株のペプチドリガーゼ相同遺伝子含有クラスターの異種宿主発現で、何れも個々に特異なシュードトリペプチドの生産を確認でき、1つについては組換え酵素を用いてジペプチドリガーゼであることを明らかにした。また、カルボニルメチレン構造の生合成に関与すると考えられる4つの酵素についても発現に成功しており順調に進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
順調に推移していることから当初の計画に沿って進める。特に、カルボニルメチレン構造の生成機構の解明を組換え酵素を用いて詳細に行う。
また、昨年度解析を開始した、ペプチドリガーゼ相同遺伝子を持つ他のクラスターについても解析を継続する。
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