研究課題/領域番号 |
15H03526
|
研究機関 | 東京工業大学 |
研究代表者 |
生駒 俊之 東京工業大学, 物質理工学院, 准教授 (20370306)
|
研究分担者 |
田中 利明 東京工業大学, 生命理工学院, 助教 (40263446)
杉山 友明 東京工業大学, 物質理工学院, 助教 (90744178)
|
研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
|
キーワード | コラーゲン / 遺伝子導入 / 配向構造 |
研究実績の概要 |
コラーゲン溶液の電解質成分を調整することで、電気化学反応を安定に生じさせ、コラーゲン線維とアパタイトの複合体を形成することに成功した。これは、水酸化物イオンの拡散により、溶媒のpHを順次変化させたことによる。また、電圧依存性と印加時間を明らかにし、コラーゲン線維中のアパタイト複合量の傾斜化を行った。一方で、コラーゲン線維からなるゲルの形状を制御するため、異なる形態の電極を用いて電圧印加を行い、ゲルの形態制御が可能であることを明らかとした。さらに、電流密度やコラーゲン濃度を高くすることで、得られるゲルが弾性体に近い粘弾性を示すことが分かった。これらの技術を活用して、糖修飾技術との融合を今後行う。また、コラーゲン分泌に関しては、プライマリーを変更することで、長期間安定に細胞培養が可能となった。共焦点レーザー顕微鏡などを用いてコラーゲン分泌のライブイメージング化を行った結果、プロセッシング過程においてコラーゲンのC-プロプロテインは細胞外への分泌が少なく、プロコラーゲンのN-プロプロテインは細胞外へ排出されることを明らかとした。各プロプロテインのウエスタンプロットからも、分泌に関して有用な知見が得られた。導入効率を向上させることは未だ課題であるが、フローサイトメトリーによる細胞分離などを試み、遺伝子を導入した細胞を分離する技術の開発に取り組んでいる。また、これらプロプロテインは細胞の極性にしたがい、分泌されることが分かった。
|
現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
糖鎖修飾したコラーゲン線維構造の構築を行う必要がある。また、コラーゲンの線維内の蛍光計量が今後の課題である。
|
今後の研究の推進方策 |
おおむね順調に研究は進捗しており、糖鎖修飾部位の決定、細胞機能の評価を行う。また、トランスフェクション効率を高める。
|