| 研究課題/領域番号 |
15H04339
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| 研究機関 | 首都大学東京 |
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研究代表者 |
三島 正規 首都大学東京, 理工学研究科, 准教授 (70346310)
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| 研究分担者 |
田岡 万悟 首都大学東京, 理工学研究科, 准教授 (60271160)
藤原 俊伸 近畿大学, 薬学部, 教授 (80362804)
河原 行郎 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (80542563)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | NMR / lncRNA / SRA / Xist / RBM15 |
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| 研究実績の概要 |
長鎖ノンコーディングRNAの一つであるSRA(steroid hormone receptor RNA activator)は、転写されたRNA分子自身が多くの因子と相互作用して、HDACをリクルートすることで核内受容体等による転写を抑制的に制御すると考えられている。本研究では、SHARP-SRA複合体の立体構造解析により、SRA等、長鎖ノンコーディングRNAによる転写調節の分子機構の解明を目指している。まず、SHARPのRNA結合ドメインであるRRM234の安定同位体標識とNMRによる帰属を行った。その機能が未知であるRRM1については、多次元NMR法により立体構造を決定した。また、CLIP法の専門家である河原行郎教授を分担者に迎え、タンパク質-RNAをクロスリンクさせるCLIP法を用いて、SHARPの標的の再探索を試み、認識配列に関する有力な情報を取得した。この際、効率のよいHalo-Tagを用いたトラップを行った。
また本研究期間において、SHARPの標的RNAに関して、哺乳類の遺伝子量補正を担う長鎖ノンコーディングRNAであるXistもその一つであるという報告が他のグループによってなされたことから、SHARP-Xist複合体の解析についても、研究協力者のSattler教授との共同で行った。Xistを標的とした場合においても、SHARPのRRM2-3の部分との結合が観測された。さらに、SHARPのホモログであるRBM15タンパク質もXistとの直接の結合に関与すると考えられたことから、RBM15のRRM1,RRM2,RRM3の発現系を構築して、安定同位体標識を施した試料調製に成功し、NMRによる解析を行った。RBM15については、RRM2-3の信号の帰属を完了した。
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| 現在までの達成度 (段落) |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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