| 研究実績の概要 |
ニホンナシの「自家不和合性」を制御するSハプロタイプには雌ずい側S因子であるS-RNaseと花粉側S因子となる複数のF-boxタンパク質遺伝子（SFBB）がコードされている. 本研究では, SハプロタイプにコードされるSFBB群を掌握し, それらがどのように分担してS-RNaseを無毒化するかを推定するとともに、和合花粉管の伸長と不和合花粉管の伸長停止を組織学的に解析することを目的とした.
平成30年度は, S3-RNase上流390kb~下流366kbのコンティグ配列を決定し, 8個のS3-SFBBを見出した. しかし, コンティグ上流末端は反復配列であったため, 染色体歩行による更なる拡張は困難となった. そこで, 未検出のSFBBを増幅するプライマーセットを用いてBACライブラリーをスクリーニングし, 235kbサブコンティグを構築し, 6個のS3-SFBBを見出した. S3には少なくとも14個のSFBBがコードされていた.
S1, S3, S5, S6, S7ホモ花粉のRNA-seqデータから構築された85個の完全長SFBB配列とS2, S4-SFBB群の推定アミノ酸配列から分子系統樹を作製したところ, SFBB群は18のグループ（対立遺伝子の種類）に分類された. 各グループ内のSFBB対立遺伝子の有無からu8, d2, d6グループのS-RNase対する特異性を推定することができた. 各グループの非翻訳領域から設計したプライマーセットを用いたRT-PCRクローニングによりSFBB配列の存在の確認を進めた.
一方で, 受粉24時間後の花粉管誘導組織ブロックをFIBで広範囲で切削し, 連続断層SEM画像を撮影することで, 三次元画像を再構築した. 切削部位に偶然存在した花粉管を捉えることができたが, 解像度が低く, 内部微細構造解析には至らなかった.
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