| 研究実績の概要 |
本研究は安全性の高い、外来遺伝子の挿入を伴わないブタ人工多能性幹細胞の樹立を試みた。我々は正確にゲノムから外来遺伝子を切り出し可能なPiggyBac トランスポゾンを使用して、新規ブタiPS細胞の樹立を試みた。導入遺伝子にはマウス由来のリプログラミング因子であるOct3/4, Klf4, Sox2, c-Myc, Lin28, Nanogの６遺伝子を発現するPiggyBacトランスポゾンを独自に作成し、ブタ胎児由来初代線維芽細胞へ導入した。なお、Oct3/4に関してiPS細胞の樹立効率を上昇させるために、MyoDの転写活性化ドメインを融合させた改変型Oct3/4を使用した。この細胞へ切り出し能力は持つが、再挿入能力のないトランスポゼースを発現するプラスミドの導入を行った。切り出し能力を持つトランスポゼースと自己消化性の2Aペプチドを介して、赤色蛍光タンパク質RFPを同時に導入した。また切り出すトランスポゼースの効率を高めることを目的として、トランスポゼースと自己消化性の2Aペプチドを介して、赤色蛍光タンパク質RFPを同時に発現するレンチウィルスおよびレトロウィルスを作製した。現在、これらのプラスミドおよびウィルス導入後の細胞の状態に関して観察を行っている。
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