| 研究課題/領域番号 |
15H04656
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
南川 典昭 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(薬学系), 教授 (40209820)
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| 研究分担者 |
石田 竜弘 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(薬学系), 教授 (50325271)
阿部 洋 名古屋大学, 理学研究科, 教授 (80415067)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 核酸創薬 / DNAデバイス / 化学合成 / RNAi創薬 |
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| 研究実績の概要 |
本研究課題では、申請者が開発したiRed (intelligent RNA expression device; 細胞内で機能性RNAを発現し遺伝子発現抑制を誘起する、鎖長約400bpのナノDNAデバイス) の完全化学合成を達成し、これを人工ベクター (リポソーム) に搭載し、この複合体を腫瘍内微小環境の動体制御に基づく革新的デリバリー法により腫瘍内に送達することで、新規がん治療薬創製をめざす。
最終年度の平成２９年度は、まず前年度より検討を開始した新規塩基対モチーフとCuAAC反応の組み合わせによる両末端環状化iRed合成の条件を検討し、最適条件を見出した。また両末端環状化iRedがin vitro評価系において遺伝子発現抑制効果を示すことも明らかにできた。
iRedの完全化学合成については、当初計画していたEPTライゲーション法では基質のDNAフラグメントが加水分解されてしまうことが明らかとなった。そこでDNAフラグメント鎖同士をアニーリングした後に、チオリン酸基の活性化とライゲーション反応を一度に行う、in situ EPTライゲーション反応の開発に着手した。チオリン酸基だけが選択的にDNFBによって活性化され、ライゲーション反応が進行する反応条件の探索を行ったところ、pH 8.0で0.5 mMのDNFBを作用させた場合に収率よく反応を進行させることに成功した。
この改良法によってiRedの完全化学合成を達成することができた。さらに化学合成したiRedがRNAi機構による遺伝子発現抑制を誘起することも明らかとなった。
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| 現在までの達成度 (段落) |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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