2016 年度実績報告書

コンディショナルTRIC-B欠損マウスの作製と機能解析

研究課題

研究課題/領域番号	15H04698
研究機関	国立医薬品食品衛生研究所
研究代表者	山崎大樹国立医薬品食品衛生研究所, 薬理部, 主任研究官 (40467428)
研究期間 (年度)	2015-04-01 – 2019-03-31
キーワード	TRICチャネル / 小胞体 / カウンターイオンチャネル / ノックアウトマウス
研究実績の概要	当該年度の研究実績として、①コンディショナルTric-b欠損マウスの作製、および②Tric-b欠損ES細胞を用いた中枢神経系細胞系譜への分化過程におけるTRIC-Bの役割の解明について記載する。 ①コンディショナルTric-b欠損マウスの作製については、平成27年度までにEuMMCR（European Mouse Mutant Cell Repository）から購入したコンディショナルポテンシャルを有するES細胞から個体を作製し、キメラマウスを得た。その後、ターゲッティングベクター上のFRT配列に挟まれたLacZおよびNeo遺伝子を除去する目的でフリッパーゼ（Flp）のインジェクションを行い、Floxマウスを得た。今後、インジェクションにより得られた個体をCreマウスと交配させて、全身性のCAG-Creおよび心臓特異的Myh6-Creマウスと交配し、それぞれのCreに依存したTric-b欠損マウスを得る予定である。 ②Tric-b欠損ES細胞を用いた中枢神経系細胞系譜への分化過程におけるTRIC-Bの役割の解明については、Tric-b欠損ES細胞が得られたため、中枢神経系細胞系譜への分化誘導を開始した。まずはニューロスフェアまでの過程においてTric-b欠損の影響がないかを検討しており、Tric-b欠損においてもNeural stem cellへ分化する予備結果を得ている。上記2つの項目のいずれかにて、心筋細胞あるいは神経細胞などを用いてTRIC-Bを標的とした医薬品の探索を行う。最終的に、TRIC-Bの医薬品による副作用発現への関与等を明らかにすることができれば、副作用の軽減やさらにはTRIC-Bを標的とした医薬品の創出に貢献することが期待できる。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 3: やや遅れている理由平成28年度までにCAG-Creマウスと交配させて、全身でTRIC-Bが欠損しII型肺胞上皮細胞でのサーファクタント合成・分泌が原因で肺胞形成不全により新生致死となるか否かの確認を行う予定であった。しかしながら、ターゲッティングベクター上にFRT配列に挟まれたLacZおよびNeoがあり、これらを除くためにFlpをインジェクションする必要が生じ、これに時間を要した。
今後の研究の推進方策	今後は、①コンディショナルTRIC-B欠損マウスと心臓特異的Myh6-Creマウスを交配させ、心臓特異的TRIC-B欠損マウスの作出および②TRIC-B欠損ES細胞を用いて神経細胞への分化過程にTRIC-Bが寄与するかどうかを調べる。①については、平成28年度中に上述したやや遅れた理由を解決したため、CAG-CreおよびMyh6-Creマウスとの交配を同時に進める。心臓特異的TRIC-B欠損マウスの作製が完了次第、心臓機能におけるTRIC-Bの機能的役割の解明を目指す。②については、予備検討の結果得られたTRIC-B欠損によるニューロスフェア形成の障害について再現性の確認を行うとともに、マウスの脳各種部位におけるTRIC-Bの発現分布について経時的な変化を調べることを予定しており、これによりTRIC-Bが神経の発達過程のどのタイミングで重要な働きをしているかが明らかになると考えられる。