新規Wntシグナル制御系を標的とした抗癌剤の開発

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15H04806
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 藤城 光弘 東京大学, 医学部附属病院, 准教授 (70396745)
• 研究分担者: 池田 祐一 東京大学, 医学部附属病院, 准教授 (10744419) ; 熊谷 英敏 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (20281008) ; 山下 裕玄 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (50599397) ; 森田 啓行 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (60323573) ; 浅岡 良成 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (90431858)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: 内科 / 消化器内科 / 下部消化管 / 抗癌剤

研究実績の概要

最近の研究により、細胞膜におけるWntシグナル制御機構であるR-spondin-LGR4/5/6-ZNRF3/RNF43系が癌の治療標的となることが示された。そこで申請者らは、R-spondin-LGR4/5/6-ZNRF3/RNF43系を直接的に制御する化合物をスクリーニングするために酵素断片コンプリメンテーション法を応用したアッセイ系を構築した。本申請研究は、このアッセイ系を用いた低分子化合物ライブラリースクリーニングにより新規抗癌剤開発を目指すものである。ベータガラクトシダーゼは、N末端側の6kDaのオメガ断片と残りのC末端側のアルファ断片の2つに分離するとその酵素活性を失うが、両者が会合すると酵素活性が復活する。そこでR-spondin依存的なZNRF3/RNF43とLGR4/5/6の会合をモニターするため、LGR4にベータガラクトシダーゼのオメガ断片を結合させた分子（LGR4-オメガ）及びZNRF3にアルファ断片を結合させた分子（ZNRF3-アルファ）を作成し、HEK293T細胞に同時に一過性に発現させた。この細胞をR-spondinで刺激したところ容量依存的に酵素活性が上昇し、アッセイ系が計画どおりに動いていることが確認された。実際のスクリーニングでは数多くの化合物を取り扱わなければならない為HEK293T細胞のような接着細胞ではなく浮遊細胞の使用が適している。そこで引き続き株化浮遊細胞を用いて同様のアッセイ系の確立を目指した。様々な方法を用いて二つの融合分子の浮遊細胞への導入を試みたが活性を検出するために必要な遺伝子導入効率が得られなかったため方針を転換し、二つの融合分子を導入した接着細胞をアッセイ時には浮遊で使用する方法を着想した。今後はこの方法を用いて、1万の代表的な化合物から構成されるフォーカスライブラリーのスクリーニングを施行する。

現在までの達成度 (区分)

4: 遅れている

理由

多数の化合物を扱う実際のスクリーニングでは、接着細胞ではなく浮遊細胞が適しているので、株化浮遊細胞を用いたアッセイ系の確立を目指した。ウイルスベクター、エレクトロポレーション、リポフェクションなど様々な方法を用いて二つの融合分子の浮遊細胞への導入を試みたが、融合遺伝子がかなり大きいこともあり、活性を検出するのに十分な遺伝子導入効率が得られず、計画が遅れた。次に、二つの融合分子を導入した接着細胞をアッセイ時にのみ浮遊で使用する方法を着想し、この方法に適した株化接着細胞をスクリーニングした。この細胞株スクリーニングにも予想外の時間を要した。

今後の研究の推進方策

二つの融合分子を導入した接着細胞をアッセイ時には浮遊で使用する方法を着想し、この方法に適した株化接着細胞を細胞株スクリーニングにより探索した。その結果この方法にはHeLa細胞が適していることを見いだした。今回新たに樹立した“HeLa細胞を浮遊状態で使用するアッセイ系”を用いて、今後は1万の代表的な化合物から構成されるフォーカスライブラリーのスクリーニングを実施する。

研究成果

• [雑誌論文] Safety and Effectiveness of Endovenous Laser Ablation Combined With Ligation for Severe Saphenous Varicose Veins in Japanese Patients. (2016)
  • 著者名/発表者名: Izumi M, Ikeda Y, Yamashita H, Asaoka Y, Fujishiro M, Shin M, Abo Y.
  • 雑誌名: Int Heart J 巻: 57 ページ: 87-90
  • DOI: 10.1536/ihj.15-282
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Glucose metabolism in gastric cancer: The cutting-edge. (2016)
  • 著者名/発表者名: Yuan LW, Yamashita H, Seto Y.
  • 雑誌名: World J Gastroenterol. 巻: 22 ページ: 2046-2059
  • DOI: 10.3748/wjg.v22.i6.2046
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Is the transthoracic approach no longer a viable option for Siewert type II esophagogastric junction carcinoma? (2016)
  • 著者名/発表者名: Yamashita H, Seto Y.
  • 雑誌名: Translational Gastroenterology and Hepatology 巻: 1 ページ: 14
  • 査読あり
• [雑誌論文] Current therapies and investigational drugs for peripheral arterial disease. (2016)
  • 著者名/発表者名: Suzuki J, Shimamura M, Suda H, Wakayama K, Kumagai H, Ikeda Y, Akazawa H, Isobe M, Komuro I, Morishita R
  • 雑誌名: Hypertens Res. 巻: 39 ページ: 183-191
  • DOI: 10.1038/hr.2015.134
  • 査読あり
• [雑誌論文] Angiotensin II receptor blocker irbesartan attenuates cardiac dysfunction induced by myocardial infarction in the presence of renal failure. (2016)
  • 著者名/発表者名: Watanabe R, Suzuki J, Wakayama K, Kumagai H, Ikeda Y, Akazawa H, Komuro I, Isobe M
  • 雑誌名: Hypertens Res. 巻: 39 ページ: 237-244
  • DOI: 10.1038/hr.2015.141
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparative analysis of upper gastrointestinal endoscopy, double-contrast upper gastrointestinal barium X-ray radiography, and the titer of serum anti-Helicobacter pylori IgG focusing on the diagnosis of atrophic gastritis. (2016)
  • 著者名/発表者名: Yamamichi N, Hirano C, Takahashi Y, Minatsuki C, Nakayama C, Matsuda R, Shimamoto T, Takeuchi C, Kodashima S, Ono S, Tsuji Y, Fujishiro M, Wada R, Mitsushima T, Koike K.
  • 雑誌名: Gastric Cancer. 巻: 19 ページ: 670-675
  • DOI: 10.1007/s10120-015-0515-y
  • 査読あり
• [雑誌論文] Guidelines for endoscopic submucosal dissection and endoscopic mucosal resection for early gastric cancer. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ono H, Yao K, Fujishiro M, Oda I, Nimura S, Yahagi N, Iishi H, Oka M, Ajioka Y, Ichinose M, Matsui T.
  • 雑誌名: Dig Endosc. 巻: 28 ページ: 3-15
  • DOI: 10.1111/den.12518
  • 査読あり
• [雑誌論文] Outcome of salvage surgery for colorectal cancer initially treated by upfront endoscopic therapy. (2016)
  • 著者名/発表者名: Nozawa H, Ishihara S, Fujishiro M, Kodashima S, Ohtani K, Yasuda K, Nishikawa T, Tanaka T, Tanaka J, Kiyomatsu T, Kawai K, Hata K, Kazama S, Sunami E, Kitayama J, Watanabe T.
  • 雑誌名: Surgery. 巻: 159 ページ: 713-720
  • DOI: 10.1016/j.surg.2015.09.008
  • 査読あり
• [雑誌論文] Efficacy of lymph node dissection for each station based on esophageal tumor location. (2016)
  • 著者名/発表者名: Tachimori Y, Ozawa S, Numasaki H, Fujishiro M, MatsubaraH, Oyama T, Shinoda M, Toh Y, Udagawa H, Uno T, The Registration Committee for Esophageal Cancer of the Japan Esophageal Society.
  • 雑誌名: Esophagus. 巻: 13 ページ: 1-7
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Flow Cytometric Quantification of Intraperitoneal Free Tumor Cells is a Useful Biomarker in Gastric Cancer Patients with Peritoneal Metastasis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kitayama J, Emoto S, Yamaguchi H, Ishigami H, Onoyama H, Yamashita H, Seto Y, Matsuzaki K, Watanabe T.
  • 雑誌名: Ann Surg Oncol. 巻: 22 ページ: 2336-2342
  • DOI: 10.1245/s10434-014-4238-9.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phosphatidylserine-specific phospholipase A1 (PS-PLA1) expression in colorectal cancer correlates with tumor invasion and hematogenous metastasis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Iida Y, Sunami E, Yamashita H, Hiyoshi M, Ishihara S, Yamaguchi H, Inoue A, Makide K, Tsuno NH, Aoki J, Kitayama J, Watanabe T.
  • 雑誌名: Anticancer Res. 巻: 35 ページ: 1459-1464
  • 査読あり
• [雑誌論文] Solitary fibrous tumor of the greater omentum, mimicking gastrointestinal stromal tumor of the small intestine: a case report. (2015)
  • 著者名/発表者名: Urabe M, Yamagata Y, Aikou S, Mori K, Yamashita H, Nomura S, Shibahara J, Fukayama M, Seto Y.
  • 雑誌名: Int Surg. 巻: 100 ページ: 836-840
  • DOI: 10.9738/INTSURG-D-14-00141.1
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of 18F-FDG uptake for detecting lymph node metastasis of gastric cancer: a prospective pilot study for one-to-one comparison of radiation dose and pathological findings. (2015)
  • 著者名/発表者名: Okumura Y, Aikou S, Onoyama H, Jinbo K, Yamagata Y, Mori K, Yamashita H, Nomura S, Takahashi M, Koyama K, Momose T, Abe H, Matsusaka K, Ushiku T, Fukayama M, Seto Y
  • 雑誌名: World J Surg Oncol. 巻: 13 ページ: 327
  • DOI: 10.1186/s12957-015-0743-y
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] PD-1 Blockade in Tumors with Mismatch-Repair Deficiency. (2015)
  • 著者名/発表者名: Asaoka Y, Ijichi H, Koike K.
  • 雑誌名: N Engl J Med. 巻: 373 ページ: 1979
  • DOI: 10.1056/NEJMc1510353#SA1
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serum Alpha-Fetoprotein Has High Specificity for the Early Detection of Hepatocellular Carcinoma After Hepatitis C Virus Eradication in Patients. (2015)
  • 著者名/発表者名: Minami T, Tateishi R, Kondo M, Nakagomi R, Fujiwara N, Sato M, Uchino K, Enooku K, Nakagawa H, Asaoka Y, Kondo Y, Moriya K, Shiina S, Koike K.
  • 雑誌名: Medicine (Baltimore). 巻: 94 ページ: e901
  • DOI: 10.1097/MD.0000000000000901
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Sarcopenia, intramuscular fat deposition, and visceral adiposity independently predict the outcomes of hepatocellular carcinoma. (2015)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara N, Nakagawa H, Kudo Y, Tateishi R, Taguri M, Watadani T, Nakagomi R, Kondo M, Nakatsuka T, Minami T, Sato M, Uchino K, Enooku K, Kondo Y, Asaoka Y, Tanaka Y, Ohtomo K, Shiina S, Koike K.
  • 雑誌名: J Hepatol. 巻: 63 ページ: 131-140
  • DOI: 10.1016/j.jhep.2015.02.031
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Validation of the Japanese version of HFS-14, a disease-specific quality of life scale for patients suffering from hand-foot syndrome. (2015)
  • 著者名/発表者名: Mikoshiba N, Yamamoto-Mitani N, Sato K, Asaoka Y, Ohki T, Ohata M, Miyashita M.
  • 雑誌名: Support Care Cancer. 巻: 23 ページ: 2739-2745
  • DOI: 10.1007/s00520-015-2638-4
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparison of improved prognosis between hepatitis B- and hepatitis C-related hepatocellular carcinoma. (2015)
  • 著者名/発表者名: Minami T, Tateishi R, Shiina S, Nakagomi R, Kondo M, Fujiwara N, Mikami S, Sato M, Uchino K, Enooku K, Nakagawa H, Asaoka Y, Kondo Y, Yoshida H, Koike K.
  • 雑誌名: Hepatol Res. 巻: 45 ページ: E99-E107
  • DOI: 10.1111/hepr.12468
  • 査読あり
• [雑誌論文] Neuromedin S-producing neurons act as essential pacemakers in the suprachiasmatic nucleus to couple clock neurons and dictate circadian rhythms. (2015)
  • 著者名/発表者名: Lee IT, Chang AS, Manandhar M, Shan Y, Fan J, Izumo M, Ikeda Y, Motoike T, Dixon S, Seinfeld JE, Takahashi JS, Yanagisawa M
  • 雑誌名: Neuron 巻: 85 ページ: 1086-1102
  • DOI: 10.1016/j.neuron.2015.02.006
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Toward further prevention of bleeding after gastric endoscopic submucosal dissection. (2015)
  • 著者名/発表者名: Mochizuki S, Ikeda Y, Arai T, Matsuo K
  • 雑誌名: Dig Endosc. 巻: 27 ページ: 295-297
  • DOI: 10.1111/den.12441
  • 査読あり
• [雑誌論文] Recent clinical management of antithrombotic agents for gastrointestinal endoscopy after revision of guidelines in Japan. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ono S, Fujishiro M, Ikeda Y, Komuro I, Koike K
  • 雑誌名: Dig Endosc. 巻: 27 ページ: 649-656
  • DOI: 10.1111/den.12498
  • 査読あり
• [雑誌論文] Quantitative measurement of GPCR endocytosis via pulse-chase covalent labeling. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kumagai H, Ikeda Y, Motozawa Y, Fujishiro M, Okamura T, Fujio K, Okazaki H, Nomura S, Takeda N, Harada M, Toko H, Takimoto E, Akazawa H, Morita H, Suzuki J, Yamazaki T, Yamamoto K, Komuro I, Yanagisawa M
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0129394
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0129394
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Monitoring beta-arrestin recruitment via beta-lactamase enzyme fragment complementation: purification of peptide E as a low-affinity ligand for mammalian bombesin receptors. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ikeda Y, Kumagai H, Okazaki H, Fujishiro M, Motozawa Y, Nomura S, Takeda N, Toko H, Takimoto E, Akazawa H, Morita H, Suzuki J, Yamazaki T, Komuro I, Yanagisawa M
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0127445
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0127445
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] SH2B1: a new player in the regulation of cardiac hypertrophic response in failing hearts. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ikeda Y, Takimoto E, Komuro I
  • 雑誌名: Cardiovasc Res. 巻: 107 ページ: 197-199
  • DOI: 10.1093/cvr/cvv172
  • 査読あり
• [雑誌論文] Acute myocardial infarction that resulted from poor adherence to medical treatment for giant coronary aneurysm: the importance of patient education in the chronic phase of Kawasaki disease. (2015)
  • 著者名/発表者名: Motozawa Y, Uozumi H, Maemura S, Nakata R, Yamamoto K, Takizawa M, Kumagai H, Ikeda Y, Komuro I, Ikenouchi H
  • 雑誌名: Int Heart J. 巻: 56 ページ: 551-554
  • DOI: 10.1536/ihj.15-155
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Biased agonism of the angiotensin II type I receptor: a potential strategy for the treatment of acute heart failure. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ikeda Y, Kumagai H, Motozawa Y, Suzuki J, Komuro I
  • 雑誌名: Int Heart J. 巻: 56 ページ: 485-488
  • DOI: 10.1536/ihj.15-256
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A food-derived flavonoid luteolin protects against angiotensin II-induced cardiac remodeling. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakayama A, Morita H, Nakao T, Yamaguchi T, Sumida T, Ikeda Y, Kumagai H, Motozawa Y, Takahashi T, Imaizumi A, Hashimoto T, Nagai R, Komuro I
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0137106
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0137106
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Next generation ARBs: going beyond modulation of the renin-angiotensin system. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ikeda Y, Kumagai H, Motozawa Y, Suzuki J, Komuro I
  • 雑誌名: Int Heart J. 巻: 56 ページ: 585-586
  • DOI: 10.1536/ihj.15-295
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Polyglycolic acid sheets and fibrin glue decrease the risk of bleeding after endoscopic submucosal dissection of gastric neoplasms (with video). (2015)
  • 著者名/発表者名: Tsuji Y, Fujishiro M, Kodashima S, Ono S, Niimi K, Mochizuki S, Asada-Hirayama I, Matsuda R, Minatsuki C, Nakayama C, Takahashi Y, Sakaguchi Y, Yamamichi N, Koike K.
  • 雑誌名: Gastrointest Endosc. 巻: 81 ページ: 906-912
  • DOI: 10.1016/j.gie.2014.08.028
  • 査読あり
• [雑誌論文] Polyglycolic acid sheets with fibrin glue can prevent esophageal stricture after endoscopic submucosal dissection. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sakaguchi Y, Tsuji Y, Ono S, Saito I, Kataoka Y, Takahashi Y, Nakayama C, Shichijo S, Matsuda R, Minatsuki C, Asada-Hirayama I, Niimi K, Kodashima S, Yamamichi N, Fujishiro M, Koike K.
  • 雑誌名: Endoscopy. 巻: 47 ページ: 336-340
  • DOI: 10.1055/s-0034-1390787
  • 査読あり
• [雑誌論文] Thienopyridine derivatives as risk factors for bleeding following high risk endoscopic treatments: Safe Treatment on Antiplatelets (STRAP) study. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ono S, Fujishiro M, Yoshida N, Doyama H, Kamoshida T, Hirai S, Kishihara T, Yamamoto Y, Sakae H, Imagawa A, Hirano M, Koike K.
  • 雑誌名: Endoscopy. 巻: 47 ページ: 632-637
  • DOI: 10.1055/s-0034-1391354
  • 査読あり
• [雑誌論文] Helicobacter pylori infection is not associated with fatty liver disease including non-alcoholic fatty liver disease: a large-scale cross-sectional study in Japan. (2015)
  • 著者名/発表者名: Okushin K, Takahashi Y, Yamamichi N, Shimamoto T, Enooku K, Fujinaga H, Tsutsumi T, Shintani Y, Sakaguchi Y, Ono S, Kodashima S, Fujishiro M, Moriya K, Yotsuyanagi H, Mitsushima T, Koike K.
  • 雑誌名: BMC Gastroenterol. 巻: 15 ページ: 247
  • DOI: 10.1186/s12876-015-0247-9
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Trend and risk factors of diverticulosis in Japan: age, gender, and lifestyle/metabolic-related factors may cooperatively affect on the colorectal diverticula formation. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yamamichi N, Shimamoto T, Takahashi Y, Sakaguchi Y, Kakimoto H, Matsuda R, Kataoka Y, Saito I, Tsuji Y, Yakabi S, Takeuchi C, Minatsuki C, Niimi K, Asada-Hirayama I, Nakayama C, Ono S, Kodashima S, Yamaguchi D, Fujishiro M, Yamaji Y, Wada R, Mitsushima T, Koike K.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 10 ページ: e0123688.
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0123688
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] PLANETARIUM Study Group. Long-term efficacy and safety of rabeprazole in patients taking low-dose aspirin with a history of peptic ulcers: a phase 2/3, randomized, parallel-group, multicenter, extension clinical trial. (2015)
  • 著者名/発表者名: Fujishiro M, Higuchi K, Kato M, Kinoshita Y, Iwakiri R, Watanabe T, Takeuchi T, Sugisaki N, Okada Y, Ogawa H, Arakawa T, Fujimoto K
  • 雑誌名: J Clin Biochem Nutr. 巻: 56 ページ: 228-239
  • DOI: 10.3164/jcbn.15-1
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Foam plombage: a novel technique for optimal fixation of polyglycolic acid sheets positioned using "clip and pull" after esophageal endoscopic submucosal dissection. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ono S, Sakaguchi Y, Tsuji Y, Kodashima S, Yamamichi N, Fujishiro M, Koike K
  • 雑誌名: Endoscopy. 巻: 47 ページ: E435-436
  • DOI: 10.1055/s-0034-1392612
  • 査読あり
• [雑誌論文] Preventing esophageal stricture after endoscopic submucosal dissection: steroid injection and shielding with polyglycolic acid sheets and fibrin glue. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kataoka Y, Tsuji Y, Sakaguchi Y, Kodashima S, Yamamichi N, Fujishiro M, Koike K.
  • 雑誌名: Endoscopy. 巻: 47 ページ: E473-474
  • DOI: 10.1055/s-0034-1392975
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comprehensive Registry of Esophageal Cancer in Japan, 2007 (2015)
  • 著者名/発表者名: Tachimori Y, Ozawa S, Numasaki H, Fujishiro M, MatsubaraH, Oyama T, Shinoda M, Toh Y, Udagawa H, Uno T, The Registration Committee for Esophageal Cancer of the Japan Esophageal Society.
  • 雑誌名: Esophagus. 巻: 12 ページ: 101-129
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comprehensive Registry of Esophageal Cancer in Japan, 2008 (2015)
  • 著者名/発表者名: Tachimori Y, Ozawa S, Numasaki H, Fujishiro M, MatsubaraH, Oyama T, Shinoda M, Toh Y, Udagawa H, Uno T, The Registration Committee for Esophageal Cancer of the Japan Esophageal Society.
  • 雑誌名: Esophagus. 巻: 12 ページ: 130-157
  • 査読あり
• [雑誌論文] Video of the Month: A Novel Endoscopic Full-Thickness Resection for Early Gastric Cancer. (2015)
  • 著者名/発表者名: Niimi K, Aikou S, Kodashima S, Yagi K, Oya S, Yamaguchi D, Yamashita H, Yamamichi N, Fujishiro M, Koike K, Seto Y.
  • 雑誌名: Am J Gastroenterol. 巻: 110 ページ: 1535
  • DOI: 10.1038/ajg.2015.226
  • 査読あり