糖鎖修飾を標的とした新規NASH治療法および治療評価法の開発

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15H04810
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 鎌田 佳宏 大阪大学, 医学系研究科, 准教授 (30622609)
• 研究分担者: 真鍋 良幸 大阪大学, 理学研究科, 助教 (00632093) ; 三善 英知 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (20322183)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: Mac-2bp / fucosylation / NAFLD / Fut8

研究実績の概要

（計画１）NASH/NAFLD治療評価法の開発
1.フコシル化Mac-2bp測定系の開発　フコシル化Mac-2BPに反応して非フコシル化Mac-2bpに反応しないモノクローナル抗体を独自の方法にて作製した。現在、作製したモノクローナル抗体を精製しており、今後フコシル化Mac-2bp測定系を開発していく。また、得られた抗体がどのアプリケーションに応用可能かについての検討も進めていく。
2.これまでに開発した糖鎖バイオマーカーを組み合わせた治療効果評価システムの構築　フコシル化ハプトグロビンとMac-2bpの組合せによるNASH診断の有用性を肝生検にて組織診断を行ったNAFLD症例506名を対象に検討した。フコシル化ハプトグロビンはレクチン抗体ELISAを用いて、Mac-2bpは抗体ELISAを用いて測定した。それぞれ所属研究室で独自に開発した測定系である。その結果、フコシル化ハプトグロビンはballooning hepatocyteを、Mac-2bpは肝線維化と良く相関することがわかり、それぞれが独立してNASH診断に有用性が高いことがわかった。さらに2つのバイオマーカーの組合せにより、より精度の高いNAFLD診断法となることを明らかとし、論文化できた。今後、一般化に向けてさらに多数の症例を対象とした検討を行っていくために現在症例を収集中である。
（計画２）NASH/NAFLD治療法の開発
1.Fut8阻害剤開発　種々のFut8阻害剤を作製し、検討を行っている。阻害剤の構造を修飾することで、Fut8阻害活性を保ったまま細胞毒性が低い化合物を見出すための検討を行っている。
2.Fut8阻害剤による動物実験　細胞実験を行った後、動物実験を行っていく予定である。まだ動物に対して阻害剤を用いる検討は行っていない。

現在までの達成度 (区分)

1: 当初の計画以上に進展している

理由

フコシル化ハプトグロビンとMac-2bpの2つのバイオマーカーを用いたヒトNAFLD診断方法を開発できた。

今後の研究の推進方策

（計画１）NASH/NAFLD治療評価法の開発
1.フコシル化Mac-2bp測定系の開発　作製したモノクローナル抗体がどのアプリケーションに応用可能か検討を行っていく。ELISAに適した抗体を選択し、ELISA系を樹立していく。系が樹立できたらNAFLD患者を対象にして血中フコシル化Mad-2bp値を測定していく。
2.これまでに開発した糖鎖バイオマーカーを組み合わせた治療効果評価システムの構築　フコシル化ハプトグロビンとMac-2bpの組合せによるNASH診断法が一般的に応用可能か検討するために健診受診者NAFLD症例、肝生検で組織診断をしたNAFLD症例を収集し、これらバイオマーカーを測定していく。
（計画２）NASH/NAFLD治療法の開発
1.Fut8阻害剤開発　Fut8阻害活性を保ったまま細胞毒性が低い化合物を見出し、細胞実験を行っていく。動物実験に用いるために、細胞毒性が低い化合物を選択する。
2.Fut8阻害剤による動物実験　細胞実験を行った後、動物実験を行っていく予定である。まずは安全性の確認のために一般毒性試験（反復投与毒性試験）、特殊毒性試験（繁殖試験、催奇形性試験）をマウスを対象にして行う。さらに通常食投与マウスにFut8阻害剤を種々の濃度で投与し、肝臓でのFut8阻害活性をin vivoで検討する。安全性の確認後、種々のNASH/NAFLDモデルを用いた検討を行う。

研究成果

• [雑誌論文] A novel noninvasive diagnostic method for nonalcoholic steatohepatitis using two glycobiomarkers. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kamada Y, Ono M, Hyogo H, Fujii H, Sumida Y, Mori K, Tanaka S, Yamada M, Akita M, Mizutani K, Fujii H, Yamamoto A, Takamatsu S, Yoshida Y, Itoh Y, Kawada N, Chayama K, Saibara T, Takehara T, Miyoshi E.
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 62 ページ: 1433-43
  • DOI: 10.1002/hep.28002.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Establishment of a novel lectin-antibody ELISA system to determine core-fucosylated haptoglobin. (2015)
  • 著者名/発表者名: Shimomura M, Nakayama K, Azuma K, Terao N, Nishino K, Takamatsu S, Nakano M, Takahashi S, Kobayashi Y, Murata K, Kamada Y, Miyoshi E.
  • 雑誌名: Clin Chim Acta 巻: 446 ページ: 30-6
  • DOI: 10.1016/j.cca.2015.03.037.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Value of Fetuin-A as a Predictor of Liver Fibrosis in Patients With Nonalcoholic Fatty Liver Disease. Author's reply. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kamada Y, Miyoshi E.
  • 雑誌名: Liver Int 巻: 35 ページ: 2062
  • DOI: 10.1111/liv.12833.
• [雑誌論文] Loss of α1,6-fucosyltransferase suppressed liver regeneration: implication of core fucose in the regulation of growth factor receptor-mediated cellular signaling. (2015)
  • 著者名/発表者名: Wang Y, Fukuda T, Isaji T, Lu J, Gu W, Lee HH, Ohkubo Y, Kamada Y, Taniguchi N, Miyoshi E, Gu J.
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 5 ページ: 925-35
  • DOI: 10.1038/srep08264.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Loss of Gab1 adaptor protein in hepatocytes aggravates experimental liver fibrosis in mice. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kizu T, Yoshida Y, Furuta K, Ogura S, Egawa M, Chatani N, Hamano M, Takemura T, Ezaki H, Kamada Y, Nishida K, Nakaoka Y, Kiso S, Takehara T.
  • 雑誌名: Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 巻: 308 ページ: G613-24
  • DOI: 10.1152/ajpgi.00289.2014.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fucosylation is common type of glycosylation in pancreatic cancer stem cell-like phenotypes. (2015)
  • 著者名/発表者名: Terao N, Takamatsu S, Minehira T, Sobajima T, Nakayama K, Kamada Y, Miyoshi E.
  • 雑誌名: World J Gastroenterol 巻: 21 ページ: 3876-87
  • DOI: 10.3748/wjg.v21.i13.3876.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Secreted frizzled-related protein 5 (Sfrp5) decreases hepatic stellate cell activation and liver fibrosis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Chatani N, Kamada Y, Kizu T, Ogura S, Furuta K, Egawa M, Hamano M, Ezaki H, Kiso S, Shimono A, Ouchi N, Yoshida Y, Takehara T.
  • 雑誌名: Liver Int 巻: 35 ページ: 2017-26
  • DOI: 10.1111/liv.12757.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] N-Acetylglucosaminyltransferase V exacerbates concanavalin A-induced mouse hepatitis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kamada Y, Sato M, Kida S, Akita M, Mizutani K, Fujii H, Sobajima T, Yoshida Y, Shinzaki S, Takamatsu S, Takehara T, Miyoshi E.
  • 雑誌名: Mol Med Rep 巻: 11 ページ: 3573-84
  • DOI: 10.3892/mmr.2015.3168.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serum fucosylated haptoglobin in chronic liver diseases as a potential biomarker of hepatocellular carcinoma development. (2015)
  • 著者名/発表者名: Asazawa H, Kamada Y, Takeda Y, Takamatsu S, Shinzaki S, Kim Y, Nezu R, Kuzushita N, Mita E, Kat M, Miyoshi E.
  • 雑誌名: Clin Chem Lab Med 巻: 53 ページ: 95-102
  • DOI: 10.1515/cclm-2014-0427.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fetuin-A negatively correlates with liver and vascular fibrosis in nonalcoholic fatty liver disease subjects. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Kamada Y, Takeda Y, Kida S, Ohara Y, Fujii H, Akita M, Mizutani K, Yoshida Y, Yamada M, Hougaku H, Takehara T, Miyoshi E.
  • 雑誌名: Liver Int 巻: 35 ページ: 925-35
  • DOI: 10.1111/liv.12478.
  • 査読あり
• [学会発表] コアフコシル化のNASH病態進展に及ぼす影響について (2015)
  • 著者名/発表者名: 鎌田佳宏、竹原徹郎、三善英知
  • 学会等名: 第41回肝臓学会西部会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場
  • 年月日: 2015-12-03 – 2015-12-04
• [学会発表] A novel noninvasive diagnostic method for nonalcoholic steatohepatitis (NASH) using two glycobiomarkers (2015)
  • 著者名/発表者名: Yoshihiro Kamada, Masafumi Ono, Hideyuki Hyogo, Hideki Fujii, Yoshio Sumida, Kojiroh Mori, Saiyu Tanaka, Makoto Yamada, Maaya Akita, Kayo Mizutani, Hironobu Fujii, Akiko Yamamoto, Shinji Takamatsu, Yuichi Yoshida, Yoshito Ito, Norifumi Kawada, Kazuaki Chayama, Toshiji Saibara, Tetsuo Takehara, and Eiji Miyoshi
  • 学会等名: AASLD The Liver Meeting 2015
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2015-11-13 – 2015-11-17
  • 国際学会
• [学会発表] Ectopic expression of N-acetylglucosaminyltransferase V (GnT-V) accelerates hepatic triglyceride synthesis (2015)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Ebisutani, Yoshihiro Kamada, Sachiho Kida, Kayo Mizutani, Maaya Akita, Akiko Yamamoto, Hironobu Fujii, Tomoaki Sobajima, Naoko Terao, Shinji Takamatsu, Yuichi Yoshida, Tetsuo Takehara, Eiji Miyoshi
  • 学会等名: AASLD The Liver Meeting 2015
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2015-11-13 – 2015-11-17
  • 国際学会
• [学会発表] 糖転移酵素N-アセチルグルコサミン転移酵素V（GnT-V）の糖・脂質代謝への影響 (2015)
  • 著者名/発表者名: 鎌田佳宏、戎谷友佑、木田祥穂、山本晃子、藤井宏修、高松真二、吉田雄一、竹原徹郎、三善英知
  • 学会等名: JDDW 2015
  • 発表場所: グランドプリンスホテル新高輪
  • 年月日: 2015-10-08 – 2015-10-11
• [学会発表] N-アセチルグルコサミン転移酵素V（GnT-V）のConcanavalin A誘導性肝炎における役割 (2015)
  • 著者名/発表者名: 山本晃子、鎌田佳宏、佐藤元哉、木田祥穂、藤井宏修、三善英知
  • 学会等名: 第24回Cell Death学会学術集会
  • 発表場所: 大阪大学会館
  • 年月日: 2015-07-11 – 2015-07-12
• [学会発表] 糖転移酵素GnT-Vは肝臓での脂肪酸合成・VLDL産生促進を介して血中中性脂肪値を上昇させる (2015)
  • 著者名/発表者名: 鎌田佳宏、戎谷友佑、水谷佳代、木田祥穂、山本晃子、秋田真彩、藤井宏修、高松真二、吉田雄一、竹原徹郎、三善英知
  • 学会等名: 第2回肝臓と糖尿病・代謝研究会
  • 発表場所: シーモールパレス、下関
  • 年月日: 2015-05-23 – 2015-05-23
• [学会発表] 血清糖鎖バイオマーカー組み合わせによる非侵襲的NASH診断法～validation study (2015)
  • 著者名/発表者名: 鎌田佳宏、竹原徹郎、三善英知
  • 学会等名: 第51回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 熊本ホテルキャッスル
  • 年月日: 2015-05-21 – 2015-05-22
• [図書] Glycobiology: Biology and Medicine (2015)
  • 著者名/発表者名: Miyoshi E and Kamada Y
  • 総ページ数: 1568
  • 出版者: Springer