研究課題
前年度までに得られた臨床サンプルのデータとNrf2-p62ダブルノックアウト(DKO)マウスのフェノタイプをもとに、以下の結果を得た。１．in vitroの解析： 1）肝クッパー細胞の貪食能を検討するため、腹腔マクロファージを採取し、蛍光ラテックスビーズの取り込みによる貪食能を測定したところ、Nrf2 ノックアウト(KO)マウス、Nrf2-p62 DKOで有意に低下を認め、また、TNFα、IL-1βなど腹腔液中の炎症性サイトカインも有意に減少していた。2）門脈からのLPSの透過性の亢進を調べるため、Caco-2細胞を用い、CRISPR/Cas9システムにより、p62、Nrf2欠損細胞を作成し単層培養して細胞膜抵抗値を測定したところp62欠損細胞では有意に他の細胞に比べて低下していた。２．in vivoの解析：1）Nrf2-p62DKOマウスの肝臓癌の発症率を調べたところ50週齢のマウスでは12％（8/66）であったが、Nrf2単独欠損、p62KO、Nrf2KOマウスでは発生は認められなかった。2）病理学的に肝臓の異常の部位を検討したところ、DKOでは有意に線維化の割合が増大していた。３．臨床的探索： 臨床検体を選択し、p62, LC3-A, LC3-B,の抗体を用いて免疫染色を行い、おのおのの発現の状態、臨床病態（TNM分類、分化度、局所再発、生存率など）との比較をおこない統計学的に解析したところカプランマイヤー法ではp62、LC3-A・B とも陽性例において有意に予後不良、Cox比例ハザードモデルによる疾患特異的死亡率ではLC3-A・Bが有意に予後不良であることが示唆された。以上によって、肝臓癌の発がんについてp62欠損によるLPSの透過性の亢進が脂肪肝に作用し炎症を惹起してp62の発癌に至る可能性が示唆された。
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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