| 研究課題/領域番号 |
15H05373
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| 研究機関 | 生理学研究所 |
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研究代表者 |
村越 秀治 生理学研究所, 脳機能計測・支援センター, 准教授 (90608142)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 光応答性分子 / FRET / 蛍光寿命イメージング |
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| 研究実績の概要 |
光操作可能なシグナル阻害分子やシグナル分子を開発し、個体マウスに応用することが本研究の目的である。平成28年度は、植物の光受容タンパク質キナーゼであるPhototropin1のLOV2を用いて、光応答性キナーゼの開発に取り組んだ。我々が対象にしたキナーゼ分子を様々なリンカーでLOV2ドメインと融合した。これらの分子の、N末端とC末端にmEGFPとmCherryをそれぞれ融合したFRETセンサーを作製した。これらの分子を、HeLa細胞に遺伝子導入し、2光子蛍光寿命イメージング顕微鏡でFRETを観察することにより、青色光照射によって分子構造が閉構造から開構造に変化するものをスクリーニングした。つぎに、スクリーニングした光応答性分子にGFPを融合したものをHeLa細胞に導入した。これらの、分子間結合が青色光照射によって起こるかどうかをFRET観察により確認した。これらの実験から、光照射によってキナーゼ活性を操作できる分子のスクリーニングに成功した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の目的であった光応答性キナーゼの開発に成功しつつある。これは、2光子蛍光寿命イメージングを用いたFRETアッセイにより、高速で様々な分子のテストを行うことができるようになった事が大きい。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後、開発に成功しつつある光応答性分子の生化学アッセイを行い、詳細な解析を行う。また、アデノ随伴ウイルスベクターの作製と個体マウスへの導入を行う。
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