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2016 年度 実績報告書

スプライシング新規定量システムを利用した筋強直性ジストロフィーの治療法開発

研究課題

研究課題/領域番号 15H06161
研究機関東京大学

研究代表者

吉田 奈摘  東京大学, 生命科学ネットワーク, 特任助教 (10760069)

研究期間 (年度) 2015-08-28 – 2017-03-31
キーワードCLCN1 / MBNL / 筋強直性ジストロフィー / AON / TAT
研究実績の概要

筋強直性ジストロフィー(DM)は、様々な遺伝子で選択的スプライシングの異常が起こっており、それが症状の主原因であると考えられている。特に、筋強直に関しては、クロライドチャネルの選択的スプライシングの異常が原因であり、このスプライシングを正常化することによって筋強直が治癒することがマウスで確認されている。この選択的スプライシングの異常の主原因は、DM患者においてDMPK遺伝子の3'UTRに異常に伸長したCTGリピートが転写されたCUGリピートに、MBNLというRNA結合タンパク質が補足され、その機能不全による。したがって、MBNLを補充し、クロライドチャネルなどの選択的スプライシングを正常化することは、DM治療において重要な意義がある。そこで、本研究の目的は、ヒトのクロライドチャネルの正常化と、MBNLを細胞の外から細胞内に導入する方法を確立することとした。
まず最初のヒトクロライドチャネルの正常化は、マウスではexonを1つだけスキップすれば正常化するが、ヒトの場合は、2つのexonをスキップさせる必要があること、さらに従来の方法では区別できない異常なスプイラシングisoformが存在することが問題であった。したがって、従来の方法とは異なる真に正常なisoformだけを検出するアッセイ系により、ヒトのクロライドチャネルを正常化するアンチセンスオリゴヌクレオチド(AON)の配列を同定した。この配列はマウスで最も効果的だとされている配列とは異なることから、ヒトとマウスでは効果的なAON配列が異なることが分かった。
次に細胞の外部からMBNL1を細胞内に導入する方法として、細胞膜透過ペプチドをMBNLに融合して、ヒトの培養細胞の培養液に加えたが、細胞内のスプライシング異常を正常化するまでの導入効率を得ることが出来なかった。また、タンパク質導入試薬も試したが、同様な結果であった。

現在までの達成度 (段落)

28年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

28年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2018 2017 2016

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (2件)

  • [雑誌論文] Expansions of intronic TTTCA and TTTTA repeats in benign adult familial myoclonic epilepsy2018

    • 著者名/発表者名
      Ishiura H, Doi K, Mitsui J, Yoshimura J, Matsukawa MK, ..., Takiyama Y, Ohsawa-Yoshida N, Ishiura S, Yamasaki R, Tamaoka A, Akiyama H, Otsuki T, Sano A, Ikeda A, Goto J, Morishita S, Tsuji S
    • 雑誌名

      Nature Genetics

      巻: 50 ページ: 581-590

    • DOI

      10.1038/s41588-018-0067-2

    • 査読あり
  • [学会発表] マウス膵ベータ細胞株MIN6の飢餓ストレスに対するlncRNAを介した遺伝子発現制御機構の探索2017

    • 著者名/発表者名
      土屋一郎、荒木海人、石井智子、吉田(大澤)奈摘、太田邦史
    • 学会等名
      ConBio2017
  • [学会発表] Identification of interactions between repeat RNAs and RNA binding proteins by the Yeast Three Hybrid system.2016

    • 著者名/発表者名
      Natsumi Ohsawa-Yoshida, Josephine GALIPON, Shoichi Ishiura, Kunihiro Ohta.
    • 学会等名
      The 39th Annual Meeting of the Molecular Biology Society of Japan

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公開日: 2018-12-17  

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