研究課題
【研究目的】本研究では、膜型エストロゲン受容体GPR30の細胞内局在とシグナル伝達を調節する新規分子機構を解明し、性差医療の基盤を構築する。GPR30の細胞内局在がどのように調節されているのか、また、異なる局在が与える機能的な意義は何かを明らかにする。【研究計画と実施状況】1) GPR30発現細胞における細胞内局在の観察: 共焦点レーザー顕微鏡を用いた細胞免疫染色では小胞体オルガネラーカーとの共局在が認められた。2) GPR30を介した細胞内シグナル伝達: GPR30安定発現細胞を用い、細胞内カルシウム測定アッセイやTGFα切断実験などのGPCR機能アッセイを行い、エストラジオールやアルドステロン、GPR30選択的アゴニストG1、アンタゴニストG15による細胞内シグナル伝達への影響を解析した。3) GPR30調節タンパクの同定と機能解析：GPCRの局在とリガンド選択性を変えると報告されているreceptor-activity-modifying proteins (RAMPs)をGPR30と共発現させ、GPR30の細胞内局在とシグナル伝達への影響を解析した。RAMPsの共発現は、GPR30の細胞内局在とシグナル伝達へ影響を与えなかった。4) GPR30ノックアウトマウスの樹立：CRISPR/Cas9システムを用いてGPR30ノックアウトマウスを樹立した。5) GPR30発現臓器・発現細胞の同定：各臓器でのGPR30の発現量を定量PCRで解析した。GPR30の発現量の高かった臓器に関しては、in situ hybridization でGPR30が発現する細胞を同定した。6) GPR30ノックアウトマウスの表現型解析：無刺激・無負荷下で、血圧・体重・脈拍等の生理パラメーター測定と血液・尿検査、表現型解析を行った。
2: おおむね順調に進展している
研究は順調に進行しており、平成29年度には、3年間の研究成果のまとめとして、論文執筆・投稿を行う予定である。研究成果の新規性を保つために、平成27, 28年度は国内外での学会発表は行わなかったが、研究の進捗状況は良好であり、想定外の大きな研究成果も得られている。当初は本研究計画終了後の展開として想定していたin vivoでの解析を行う目的で、平成27年度よりin vitroの実験と平行してGPR30ノックアウトマウスの作成を開始し、平成28年度にはノックアウトマウスの樹立の成功し表現型解析を開始した。本研究計画が順調に進行すれば、GPR30 のin vivoでの機能解析結果も含めて論文にまとめられると考えている。
平成29年度は、以下の研究計画に従って研究を進める。本年度は最終年度として研究成果をまとめ、論文執筆・投稿を行う予定である。1)GPR30ノックアウトマウスの病態モデル作成と表現型解析平成28年度に樹立したノックアウトマウスについて、無刺激・無負荷下で、血圧・体重・脈拍等の生理パラメーター測定と血液・尿検査、表現型解析を行った。また、GPR30はin vivoで血圧や心機能に関与することが示唆されていることから、血圧測定および心臓超音波検査を行った。そこで平成29年度は、GPR30の発現量の多い特定臓器で疾患モデルの作製と機能解析を行うことを予定している。2)研究成果の発表・論文投稿研究計画の最終年度として、上記1) GPR30ノックアウトマウスの病態モデル作成と表現型解析までを行い、論文執筆・投稿を行う。
すべて 2016
すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件、 謝辞記載あり 1件) 図書 (1件)
Sci Rep.
巻: 6 ページ: 34560
10.1038/srep34560.
