| 研究実績の概要 |
初年度に2-ブロモプロパン等を試験物質としてラットに投与し新規精子試験法WST-8法による精子代謝能測定法、精子尾部形態測定法が従来の雄性生殖毒性試験法である精子運動能や精子数解析では検出できない影響を検出できることを示した。
第2年度には、30種類のテトラゾリウム塩を精子浮遊液を用いて一斉にスクリーニングし、WST-8以外にWST-3, WST-5等で感度よく応答することが示された。また、マウスに重金属や有機溶剤を投与してCASA(従来の精子解析法)の画像を大量に保存した。
第3年度は、マウス精子尾部の形態解析のための手法開発を試みた。その結果、CASAによる暗視野画像で尾部形態の解析を試み、未成熟精子、短尾精子の検出に成功した。さらに、同精子浮遊液を一部固定し遠心後、塗抹し、HE染色することで、尾部形態の他、頭部形態の解析を可能とした。また、精巣毒性を計測する客観的指標として精巣中の精子頭数をCASAで測定することも可能とした。
第4年度は、通常明暗と変則的明暗条件により雄マウス飼育しただけ（化学物質は未投与）で、精子数及び精子形態に変化を生ずることを突き止めた。また、ラットでは1,2-ジクロロプロパン(DCP)を皮下投与した結果、精子数、精子運動能に変化が認められない投与条件でも、精子尾部形態に異常が認められることが示せ、本研究課題で提案している暗視野精子形態解析法の有用性が確認された。
第5年度（最終年度）は以下の成果を得た。(1)DCPの作用点（精巣か精巣上体か）を病理組織標本によって確認した、(2) CASAによる精子運動能解析法の欠点を補うために①外部動画からCASAを用いてまた②外部システムを用いて、精子運動性を測定することに成功し大型機器を運搬しなければならない欠点を克服した、(3)精子運動持続性を検討するために経時的に測定できる系を確立した。
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