研究課題
申請者はこれまでに、AMPA受容体の一つであるGluA1ホモマーを光で特異的に機能破壊し、in vivoで海馬記憶を消去する新技術の開発を進めた。昨年までに分子特異性等のデータを取り終え、論文がNature biotechnology誌に掲載された(Takemoto et al. Nat. Biotechnol 2017)。今年度は昨年度に引き続き、海馬primary cultureにおいてイメージングとCALIを行い、GluA1ホモマーが含まれるスパインの形態的な特徴を解析した。一方で海馬primary cultureの場合、GluA1のシナプス移行がほとんどの細胞で起こっており、GluA1が学習などの神経活動依存的にシナプス移行するin vivoの生理的状況とは異なる。よってin vivoにおいて学習後にGluA1ホモマーの機能マッピングをすることは、primary cultureでは見いだせない知見を得る可能性がある。ここではまず、海馬依存的な受動的回避学習（IA学習）後のマウスについて海馬急性スライスを作製し、CALIを行う実験系の確立を進めた。エオシンラベルした抗体をACSFに添加し、CALIの効果を指標にラベル化抗体の濃度等の条件の確立を目指したが、抗体を添加するとスライスの生存に必要な酸素バブリングによりACSFに激しい泡立ちが起こり、スライスの生存率を大幅に低下してしまうことが分かった。そこであらかじめin vivoで海馬にラベル化抗体をinjectionしIA学習後に急性スライスを作製したところ、CALI実験が可能なことがわかり、実験系の確立に成功した。現在学習後の様々な時間においてCALIを行い、in vivoにおけるGluA1ホモマーの機能マッピングを進めている。
すべて 2017
すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (2件)
Nat. Biotechnol.
巻: 35 ページ: 38-47
10.1038/nbt.3710
Sci. Rep.
巻: 1863 ページ: 8471
10.1038/s41598-017-08849-3
