| 研究課題/領域番号 |
15K06844
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
松田 裕之 日本大学, 医学部, 研究医員 (10646037)
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| 研究期間 (年度) |
2015-10-21 – 2018-03-31
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| キーワード | HCaRG / COMMD5 / 腎細胞癌 / EGFR / 間葉上皮移行 |
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| 研究実績の概要 |
生活習慣病は腎臓障害を引き起こすだけでなく、腎細胞癌の独立した危険因子であることが報告されている。しかし、なぜ生活習慣病が腎細胞癌を引き起こすのか、明確な成因はまだ明らかになっていない。
Hypertension-related, calcium-regulated gene(HCaRG/COMMD5)は腎臓の近位尿細管に強く発現しており、細胞の増殖･分化･移動などに関与している。我々はこれまでに、HCaRGがp53経路とは独立したp21の発現誘導を介し、障害を受け脱分化した尿細管上皮細胞の再分化を促進させ、急性腎障害後の尿細管の修復を促進させる事を報告した。また、HCaRGを培養腎細胞癌細胞株に強制発現させるとErbB受容体の発現･活性が低下し、その下流のRAS/MAPキナーゼ やPI3キナーゼ/Akt経路の活性化が抑制され、癌細胞の間葉上皮移行(MET)が促進し増殖が抑制されることを明らかにした。
今回は、腎蔵におけるHCaRGの発現レベルと、腎細胞癌の発生･進展･予後や生活習慣病などの患者背景との因果関係を明らかにするために、本学付属病院で淡明細胞型腎細胞癌の摘出手術を受けた患者117名の病理組織標本を用いて、腎細胞癌と隣接する非腫瘍部の腎臓におけるHCaRGの発現を免疫染色法を用いて検討した。HCaRGの発現は、隣接する非腫瘍部の近位尿細管に比べて腎細胞癌で低下していた。さらに、手術時の腫瘍径がより大きい患者群の近位尿細管では、腫瘍径が小さい患者群の近位尿細管と比べて明らかにHCaRGの発現が低下していた。この腫瘍径がより小さく、非腫瘍部の尿細管におけるHCaRGの発現が高い患者群の疾患特異的5年生存率は、腫瘍径が大きく、HCaRG低発現の患者群に比べて有意に改善していた。
以上より、尿細管におけるHCaRGの発現は、新たな腎細胞癌の再発リスクや予後の予測因子となる可能性が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度は採用決定後の11月より、1997年～2006年までに本学付属病院で淡明細胞型腎細胞癌の摘出手術を受けた患者117名の病理組織標本を集め、HCaRGの免疫染色を開始した。腎細胞癌と近接する非腫瘍部の尿細管におけるHCaRGの発現レベルについて4段階に分けて半定量を行った。また、診療録より、腎細胞癌診断時の主訴･初期症状、手術時の最大腫瘍径、TMN分類、Fuhrman分類、腎機能、既往歴(高血圧症、糖尿病、高脂血症)、肥満(BMI)、嗜好(アルコール、タバコ)、服薬歴、手術後の転帰などの情報のデータベース化を行った。これまでの検討において、HCaRGは腎細胞癌で発現が低下しており、さらに腫瘍径が大きく予後不良であった患者の正常尿細管においても発現が低下していることが明らかになった。さらに、手術時の最大腫瘍径と予後の間には特に強い相関関係がみられた。我々はこれまでに、培養癌細胞株に強制発現させたHCaRGが、EGFRの発現を抑制し癌細胞の増殖を抑制することを明らかにしてきた。また、マウスの皮下に同種移植されたHCaRG高発現腎癌細胞株の腫瘍形成は、野性型腎癌細胞株に比べて明らかに抑制される。今回、新たに培養尿細管細胞株から分泌したHCaRGが、野性型腎細胞癌細胞株のEGFRの発現を抑制し、癌細胞の増殖を抑制することを明らかにした。この分泌されたHCaRGは、腫瘍形成能の指標の一つであるスフェア形成も抑制していた。これらの結果より、腎細胞癌の発生や進展抑制には正常近位尿細管におけるHCaRGの発現が、深く関わっている可能性が示唆された。これらの研究結果の一部については、現在専門誌に論文を投稿準備中である。
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| 今後の研究の推進方策 |
淡明細胞型腎細胞癌患者の検体を用いたHCaRGの発現解析の目標症例数は200症例であるため、今後2006年以降に手術を受けた患者についても検討を行っていく予定である。これまでに、EGFRは腎細胞癌の進展や予後の悪化因子として報告されている。我々のこれまでの検討において、HCaRGは腎細胞癌細胞のEGFRの発現を抑制し、癌細胞の増殖を抑制していた。そこで、これまでにHCaRGの免疫染色を行った患者の検体を用いてEGFRの免疫染色を行い、尿細管におけるHCaRGと腎細胞癌におけるEGFRの発現レベルと、腫瘍の進展度や患者予後との因果関係を明らかにする。また、共同研究を行っているモントリオール大学の研究グループと協力し、HCaRGがEGFRの発現を抑制するメカニズムについて明らかにしていく。さらに、これまでに確立したHCaRG高発現脱分化脂肪細胞(DFAT: 成熟脂肪細胞を天井培養という方法で、細胞に長期のストレスを与え得られる未分化な多能性細胞)を用いて、HCaRGが細胞の分化誘導･METに与える影響を明らかにして行く予定である。そして、モントリオール大学から授受されたHCaRG高発現遺伝子改変マウスを用いて、鉄ニトリロ三酢酸の腹腔内反復投与にて腎細胞癌の発癌誘導を行い、HCaRGの癌発生の予防効果の検討を行う予定であるために、現在動物モデルの確立を行っている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
今年度が採用初年度であるが、採用決定が11月であったために研究実施期間が当初の研究計画より短く、購入品目が少なくなったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
翌年度分として請求した助成金と合わせて、実験動物の飼育、及び ヒト腎細胞癌とその周辺の腎臓の組織を、免疫染色法を用いて遺伝子発現を解析するために必要な消耗品の購入等に充てる予定である。
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