| 研究課題/領域番号 |
15K06982
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| 研究機関 | 武蔵野大学 |
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研究代表者 |
桑迫 香奈子 武蔵野大学, 薬学部, 講師 (10568736)
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| 研究分担者 |
坂本 泰一 千葉工業大学, 先進工学部, 教授 (40383369)
吉村 明 東北医科薬科大学, 薬学部, 講師 (70302164)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | pre-mRNAスプライシング / NMR / SELEX |
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| 研究実績の概要 |
さまざまながん細胞において，スプライシング因子SF3b1の特定のリジン残基に集中的に変異が生じていることが報告されてきている。しかし，これらのリジン残基が実際どのようにスプライシングに影響し，がん化と関わっているのかは未知である。本研究は，構造生物学的手法によってSF3b1のリジン残基の役割とその変異がスプライシングに与える影響を明らかにすることを目的としている。
大腸菌を宿主とした遺伝子組み換えによるSF3b1タンパク質の調製は，タグや宿主大腸菌の種類，バッファーの組成等を再検討したが，収量が少なく実験は進まなかった。そこで，SF3b1がブランチ部位に結合するU2 snRNPの構成因子であることを踏まえ，SF3b1と共に機能するタンパク質にも注目し，これらの発現系の構築と相互作用解析，および複合体状態での精製を試みた。その中で，SF3b1と同様に，がん細胞での変異が報告されているタンパク質について，NMR法によってタンパク質間相互作用を検出できた。このタンパク質はSF3b1ではなかったものの，SF3b1の機能に影響を与える可能性があることや，がんとスプライシング因子の変異との関係の解明に役立つと考えられるため，現在，複合体形成部位の安定同位体標識した試料を調製し，立体構造解析を行っている。
また，紫外線架橋法によって，SF3b1はブランチ部位の両側（配列が保存されていない領域）に結合し，ブランチ部位には別のサブユニットが結合すると報告されている。しかし，その報告から15年以上経ったが，未だブランチ部位の認識・結合メカニズムは明らかになっていない。そこで，SELEX法を用いて，ブランチ部位に結合するサブユニットの特異性を明らかにしようと試みた。今年度は得られたRNA配列について，定量的な相互作用解析および結合部位の同定を行い，さらに共結晶化を試みている。
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