研究課題/領域番号 |
15K06989
|
研究機関 | 弘前大学 |
研究代表者 |
坪井 滋 弘前大学, 医学(系)研究科(研究院), 研究員 (20526727)
|
研究分担者 |
大山 力 弘前大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (80282135)
|
研究期間 (年度) |
2015-10-21 – 2018-03-31
|
キーワード | 腫瘍免疫 / 細胞傷害性Tリンパ球(CTL) / 膀胱癌 / リンパ節転移 |
研究実績の概要 |
(1)O-グリカン修飾の変化によるHLA-A分子の細胞表面表出量の比較 C2GnT高発現膀胱癌細胞YTSにHLA-A24(日本人に最も多いタイプ)のcDNAを導入し、HLA-A24安定発現細胞株YTS(A24YTS)、および、C2GnT発現をノックダウンした細胞A24C2KDを作製した。両細胞のHLA-A24の細胞表面表出量を、抗HLA-A24を用いた生細胞の染色とFACS解析によって比較した結果、A24C2KDの方がHLA-A24細胞表面表出量が低いことがわかった。さらに、生細胞をビオチンでラベルしたのちにアビジン・アガロースを用いた免疫沈降を行い、細胞表面に表出したHLA-A24の量をウェスタン・ブロッティングにより比較した結果もA24C2KDの方が低いことがわかった。
(2)O-グリカン修飾の変化によるHLA-A分子の細胞内輸送過程の解析 A24YTSとA24C2KDで、HLA-A24分子の細胞表面への表出速度を阻害剤ブレフェルディンA(BFA)を用いて解析した結果、差がないことがわかった。次に、HLA-A24分子のエンドサイトーシス速度を阻害剤Pitstop 2-200を用いて解析した結果、A24C2KDの方がHLA-A24のエンドサイトーシス速度が高いことがわかった。
|
現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
研究計画に記載された平成27年度計画の実験2つを行い、それぞれ、結果を得ることができた。これは、全期間に計画した実験5つのうち2つを完遂することができたこと意味する。このため、おおむね順調に進展していると評価できる。
|
今後の研究の推進方策 |
研究計画に記載された平成28年度以降の実験(3)~(5)のうち、(3)O-グリカン修飾の変化によるHLA-A分子と抗原ペプチドとの親和性比較。および、(4)C2GnT発現抑制膀胱癌細胞によるCTL腫瘍免疫抵抗性のin vivoにおける検討。の2つの実験を行い、O-グリカン修飾変化によるCTL腫瘍免疫逃避機構解明に迫りたい。
|
次年度使用額が生じた理由 |
交付内定が9月と、通常よりも6か月遅かった。このため、初年度の研究期間が短くなり、その分の使用を翌年度に繰り越さざるを得ない状況になった。
|
次年度使用額の使用計画 |
研究計画で初年度購入予定とした機器(顕微鏡用デジタルカメラ)を購入し、遂行予定であった実験に使用することを計画している。さらに、次年度に繰り越した資金を使って、初年度に行えなかった、リンパ節標本を用いたC2GnT、および、HLA-Iの発現解析を行うことを計画している。
|