| 研究実績の概要 |
脊椎動物脳には学習・記憶・社会性行動に深くかかわる酸性多糖"ポリシアル酸(polySia, PSA)"が存在する。我々はこれまでpolySiaがその機能を発揮する際、従来考えられてきた反接着性相互作用を持つ"反発性の場"をつくりだしているだけでなく、神経作用因子の保持および放出(提示)作用を持つ"誘因性の場"も提示することを世界に先駆けて明らかにしてきた。本研究では、我々が明らかにしてきたpolySiaの”誘因性の場”に着目し、神経作用因子の保持および放出メカニズムを分子レベルで詳細に解析することにより、その存在意義を細胞および個体で検証することを目的としている。本年度は分子レベルでの解析のための可溶性NCAMと細胞レベルでの解析を行うための膜結合型NCAMを発現する細胞を確立した。あわせて齧歯類CHO細胞およびヒトHEK293細胞にヒトNCAM-Fcを遺伝子導入し、分泌型NCAM-Fcを安定発現する細胞株を樹立した。これらの可溶性NCAMおよび膜結合型NCAM発現細胞に対して、各種ポリシアル酸転移酵素を組み込んだプラスミド(pBudベクター)を用いpolySia-NCAMを発現する細胞株を作製し、それぞれの酵素が生合成するpolySiaを持つpolySia-NCAMの精製を行った。またpolySia-NCAMと神経作用因子との分子間力測定のために、polySia-NCAM-Fcは、センサーチップ上に調製した自己組織膜に埋め込んだprotein-Aを介して固相化し、アナライトとしてすでに結合性が明らかになっている各種神経作用因子(BDNF, proBDNF, FGF2, GDNF、またpolySiaと相互作用する可能性のある各種因子群-具体的にはHGF, CNTF, CCL21, CCL19）との相互作用を表面プラズモン共鳴法に基づくビアコアで解析を一部行った。
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