| 研究課題/領域番号 |
15K07162
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| 研究機関 | 摂南大学 |
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研究代表者 |
吉岡 泰秀 摂南大学, 理工学部, 助教 (40572839)
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| 研究分担者 |
山口 政光 京都工芸繊維大学, その他部局等, 教授 (00182460)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 脂質代謝 / ショウジョウバエ / 転写 / 脂肪体 |
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| 研究実績の概要 |
転写因子NF-Yを構成する３つのサブユニットの中でDNA結合サブユニットであるdNF-YAをノックダウンした３令幼虫を用いたRNA-seq解析により脂質代謝に関連する多くの遺伝子がNF-Yの制御を受けていることが示唆されている(未発表）。本研究では転写因子dNF-Yが脂質代謝に関わる機構を脂肪体を用いて研究する。また、脂肪体は哺乳動物の肝臓に相当する器官であることから、ショウジョウバエ脂肪体を用いた新規肝機能解析のモデルを構築する。
dNF-YAと遺伝学的な相互作用が見られた遺伝子群のうち、Lipaseの一つであるLipase4 (Lip4) 遺伝子の上流域にはNF-Yが結合するコンセンサス配列が存在することをを見出した。ルシフェラーゼトランジェントアッセイ（Lucアッセイ）において、このコンセンサス配列に変異を導入することで転写活性が上昇することを新たに見出している。また、個体レベルの解析においてはdNF-YAを脂肪体で特異的にノックダウンしたショウジョウバエ個体では脂肪体に蓄積されている脂質が減少することも新たに見出している。上記の成果を２０１５年度の分子生物学会年会で発表した。また、ショウジョウバエS2細胞を用いたクロマチン免疫沈降法による解析を試みたところ、Lip4遺伝子の上流域に転写因子NF-Yが結合していることを示すDNAの増幅が見られることも見出している。今後、さらなる実験データの精査を行い、精度を上げること、また、dNF-YAを全身でノックダウンしたショウジョウバエの３令幼虫を用いたqRT-PCRを行うことで定量的に内在性のLip4の発現量に劇的な変化が見られるかどうかを解析し、Lucアッセイの結果に矛盾しないようであるならば転写因子NF-YによるLip4遺伝子の制御を介した脂質代謝の機構を新たに見出したことを学術論文として成果報告する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
転写因子NF-Yにが脂質代謝に関わる要因の一つとしてLIpaseファミリーの一つであるLip4 遺伝子の上流域にはNF-Yが結合するコンセンサス配列が存在することをを見出した。ルシフェラーゼトランジェントアッセイ（Lucアッセイ）において、このコンセンサス配列に変異を導入することで転写活性が上昇することを新たに見出している。また、個体レベルの解析においてはdNF-YAを脂肪体で特異的にノックダウンしたショウジョウバエ個体では脂肪体に蓄積されている脂質が減少することも新たに見出している。転写因子NF-Yが脂質の代謝の制御に関わる一つの要因としてLip4遺伝子を抑制的に制御していることを示唆する結果が分子レベル、個体レベルでともに見出すことに成功している。
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| 今後の研究の推進方策 |
引き続き転写因子dNF-Yが制御する脂質代謝関連遺伝子の候補を探索し、同定することで脂質代謝におけるdNF-Yの転写制御のネットワークについて解析をすすめる。また、脂肪体は生殖細胞、成虫原基、初期胚等と比較しても研究例が少ないことから、脂肪体解析における分子マーカー等を検討することでさらなる脂肪体を用いた研究を進める。
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