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2015 年度 実施状況報告書

出芽酵母のearly , lateゴルジ槽と細胞質膜へ膜蛋白質が局在化される機構

研究課題

研究課題/領域番号 15K07354
研究機関東京大学

研究代表者

野田 陽一  東京大学, 農学生命科学研究科, 助教 (90282699)

研究期間 (年度) 2015-04-01 – 2018-03-31
キーワード酵母 / 小胞輸送 / ゴルジ体
研究実績の概要

出芽酵母のearly , lateゴルジ槽と細胞質膜へ膜蛋白質が局在化される機構を明らかとするために,本研究ではゴルジ体に局在するII型の膜蛋白質であり,N糖鎖,O糖鎖付加に関わるマンノース転移酵素を対象として実験を行っている.それらの局在化機構に関して可能な限り網羅的に調べるために,本年度はまず今までにタグの付加による観察をしていなかったマンノース転移酵素残りの二種類にもタグを付加し,顕微鏡による細胞内の局在の解析や,当研究室で開発した免疫学的な手法によりゴルジ体early槽,late槽を単離するサブコンパートメント方により,ゴルジ体における分布を定量的に解析した.予想通り,それらがゴルジ体early槽により多く局在していることを見出した.また当研究室で取得した,ERからの候補搬出アダプター膜蛋白質をコードする遺伝子の多重遺伝子欠損株を活用することにより,それらのマンノース転移酵素のERからの搬出に関わる蛋白質を探索した.現在候補蛋白質の解析を行っている.またサブコンパートメント方のさらなる改良を目的とし,より簡便に,より定量的にゴルジ体のearly, late間の分布を検出できるよう,免疫沈降に用いるビーズの選択など,系の調整を行った.また細胞質膜に向かうII型膜蛋白質に関して,ゴルジ体に局在する同じトポロジーを持った蛋白質や,GFP蛋白質とのキメラを発現し,どの領域,また必要なアミノ酸配列がlate Golgi体から細胞質膜に関わるのか,またその過程に関与する細胞の因子を探索するための材料の調製に着手した.

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

最初の年度の計画にほぼ沿った形で進めることができ,次年度以降の研究に必要なサブコンパートメント精製系の開発,調整を行うことができた.また必要な酵母菌株やプラスミドなどの試薬の準備を行い,それらを用いた解析に着手した.

今後の研究の推進方策

出芽酵母のマンノース転移酵素のearly, lateゴルジ槽への局在をサブコンパートメント方により,定量化し,各槽への特異的な局在に必要な領域や蛋白質を探索する.またlateゴルジ層から細胞質膜への輸送に必要な蛋白質を探索する.

  • 研究成果

    (4件)

すべて 2016 2015

すべて 学会発表 (4件) (うち国際学会 1件)

  • [学会発表] 出芽酵母の細胞壁β-1, 6-glucanの合成に関わるKre6の機能に必須なアミノ酸残基の同定2016

    • 著者名/発表者名
      東亮介,足立博之,依田幸司,鎌倉高志,野田陽一
    • 学会等名
      日本農芸化学会2016年度大会
    • 発表場所
      北海道 札幌コンベンションセンター
    • 年月日
      2016-03-28 – 2016-03-30
  • [学会発表] Kre5 of Saccharomyces cerevisiae displays a cleavage activity to β-1, 6-glucan2015

    • 著者名/発表者名
      Yoichiro Kitazawa, Koji Yoda, and Yoichi Noda
    • 学会等名
      Fungal Cell Wall 2015
    • 発表場所
      Institut Pasteur (Paris, France)
    • 年月日
      2015-10-26 – 2015-10-28
    • 国際学会
  • [学会発表] 出芽酵母のER局在機能未知必須タンパク質Pga2の機能解析2015

    • 著者名/発表者名
      鵜口尚人、高橋竜一、足立博之、依田幸司、野田陽一
    • 学会等名
      酵母遺伝学フォーラム第48回研究報告会
    • 発表場所
      広島大学
    • 年月日
      2015-08-31 – 2015-09-02
  • [学会発表] 出芽酵母の細胞中のβ-1, 6-glucan切断活性の解析2015

    • 著者名/発表者名
      北澤陽一郎、足立博之、依田幸司、野田陽一
    • 学会等名
      酵母遺伝学フォーラム第48回研究報告会
    • 発表場所
      広島大学
    • 年月日
      2015-08-31 – 2015-09-02

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公開日: 2017-01-06  

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