| 研究実績の概要 |
ユーフォルビア科植物から，アオサンゴ（別名ミルクブッシュ，Euphorbia tirucalli）とハナキリン（Euphorbia milli）の地上部で発現するmRNAの網羅的解析を次世代シーケンサにて行い，得られたデータのトリミング処理，de novoアッセンブル処理，ORF予測，予測アミノ酸配列への変換処理を行い，両植物サンプルからおよそ4万程度の配列をそれぞれ得た。これらのアミノ酸配列をswissprotデータベースからBLASTP検索，HMMERによる活性部位などのモチーフ相同性解析などから（ジ）テルペン環化酵素遺伝子候補をアオサンゴから５種（EtDTCL-1,-2,-3,-4,-5とそれぞれ命名），ハナキリンから１１種（EmDTCL-11,-12,-13,-14,-15,-16,-21,-22,-23,-24と命名）を選抜した。これらのうち，TargetP検索で葉緑体移行シグナルを持つことが示唆されたのは，アオサンゴからはEtDTCL-1.-2,-4の３種類，ハナキリンではEmDTCL-15,-22,-23,-23の４種であった。
これらの遺伝子について大腸菌による組換えタンパク質生産を試みた結果，EmDTCL-15, EmDTCL23およびEmDTCL-24について成功した。これらの酵素について基質ゲラニルゲラニル２リン酸（GGDP）と反応させたところ，EmDTCL-15とEmDTCL23に生成物が確認されたが，構造は未解明のままである。EmDTCL-24についてはGGDPとの直接の反応が確認できず，生成物も検出されなかった。そこでGGDPから１段階環化反応の進んだコパリル２リン酸（CDP）を基質に反応を行ったところ，ent-CDPのみから新たな化合物が検出されたが，syn-CDPからは生成物が得られなかった。
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