| 研究課題/領域番号 |
15K07776
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
土佐 紀子 北海道大学, 医学研究科, 助教 (20312415)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 動物アレルギー / 実験動物 / 胸腺 / レパトア形成 / Tリンパ球 / 環境要因 / Th1/Th2バランス / Lipocalin |
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| 研究実績の概要 |
実験動物アレルギーは動物実験従事者において職業病として重大な問題となっている。これまでの予防対策は、アレルゲン暴露を防御により回避する方法が取られてきたが、実験動物アレルギーは増えている。アレルゲン暴露回避の限界を鑑み、実験動物アレルギーの抜本的な予防対策ための実験動物アレルギー発症機構を解明することを最終目的とし、本研究では、1) 胎仔期と幼若期の環境要因がアレルゲンである外来性Lipocalinによるアレルギー発症に影響を与えるかTh1/Th2バランスに注目して解析し、2) その影響には胸腺における内在性Lipocalinに対するレパトア選択が関与しているか明らかにする。
初年度（平成27年度）においては、内在的にTh1優位のC57BL/6系統（C57BL/6）とTh2優位のBALB/c系統（BALB/c）を用い、実験動物アレルゲンの一つであるイヌLipocalin（Can f 1）感作誘導による免疫応答の解析を行い、両系統でTh2優位の免疫応答が誘導され、その傾向は内在的にTh2優位のBALB/cで強いことを明らかにした。
2年度（平成28年度）においては、以下の結果からCan f 1感作誘導によるアレルギー誘導は環境要因により影響を受ける可能性が示唆された。
１．Th2優位となる環境要因との関係を調べるため、Th2アジュバントであるアルミニウム塩（Alum）を用いTh2の免疫応答を強制的に誘導した状態（Alum＋）におけるCan f 1による感作誘導を解析したところ、BALB/cと C57BL/6の両系統の血清中のIgEの上昇は、Alum＋とAlum－とで同じ程度であるのに対して、IL-13の産生はAlum－と比べてAlum＋で優位に抑制されていた。
２．この現象がCan f 1感作誘導による免疫応答に特異的であるか明らかにするため、食物アレルギーの代表的なアレルゲンであるオブアルブミン（OVA）について同じ解析を行ったところ、両系統の血清中のIgEの上昇およびIL-13の産生は、Alum の影響は認められなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
2年度（平成28年度）の研究実施計画は、1)環境要因と実験動物アレルギー発症との関連性についての解析、2)内在性Lipocalinの実験動物アレルギー発症への関与に関する解析の二つの計画を立てていた。
1)の計画に関しては、「研究実績の概要」で報告した通りである。2)の計画に関しては、内在性LipocalinであるMus m 1のKOマウスが作出された論文が発表され、そのマウスを供与される予定で計画を進めたが最終的に搬出国（中国）の衛生証明書が発行されず断念した。
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| 今後の研究の推進方策 |
本研究はでは、1)環境要因と実験動物アレルギー発症との関連性についての解析、2)内在性Lipocalinの実験動物アレルギー発症への関与に関する解析、3)内在性Lipocalinに対するTリンパ球レパトア選択の実験動物アレルギー発症への関与に関する解析、を計画している。
1)に関しては、さらに幼若期における抗原の暴露を居住空間に常在している特定の抗原に絞り、当初予定していたTh2アジュバントであるコレラトキシン、易熱性毒素、Der p 1（ダニアレルゲン）、対照としてTh1アジュバントである完全フロイドアジュバントに加え、外来性Lipocalin（Can f 1）およびプロテインAについても同様に解析する。
2)に関しては、内在性LipocalinであるMus m 1のKOマウスを用いた解析を行うことが出来なくなったため次の実験行う。BALB/cと C57BL/6の尿中のMus m 1の量がCan f 1により感作誘導される免疫応答と相関するか解析し、相関性が示された場合はMus m 1を高発現または低発現する近交系マウスにおいてCan f 1の感作誘導が抑制または増強されるか解析を行い、次いで、Mus m 1が高発現する環境要因を解析する。Mus m 1と実験動物アレルギー発症との関連性が低い場合は、Lipocalinはスパーファミリーを形成していることから、他のLipocalinの可能性を検討し研究を進める。
3)に関しては、当初の予定通りTDAG8-Tgマウスを使用した実験に加え、2)の実験で明らかとなった実験動物アレルギー発症と関連する内在性LipocalinのKOマウスに、胎仔期（妊娠期）から胸腺分化がほぼ完了する生後5週間までアデノウイルスベクターで内在性Lipocalinを高発現させ、その後、外来性Lipocalin（Can f 1）により感作しアレルギーが誘導されるか解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初、内在性LipocalinであるMus m 1のKOマウスが作出された論文が発表され、そのマウスが供与されることとなり、その輸送費を計上し計画を進めていたが、搬出国（中国）の衛生証明書が発行されず、凍結胚等の他の導入方法を検討したが、最終的に断念したため、下欄の使用計画に記載された実験を実施する。
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| 次年度使用額の使用計画 |
以下の実験を実施するために次年度使用額を計上する。
内在性LipocalinであるMus m 1のKOマウスを用いた解析を行うことが出来なくなったため、BALB/cと C57BL/6の尿中のMus m 1の量がCan f 1により感作誘導された免疫応答と相関するか解析し相関性が示された場合は、Mus m 1を高発現または低発現する近交系マウスにおいてCan f 1の感作誘導が抑制または増強されるか解析を行い、次いで、Mus m 1が高発現する環境要因を解析する。Mus m 1と実験動物アレルギー発症との関連性が低い場合は、Lipocalinはスパーファミリーを形成していることから、他のLipocalinの可能性を検討し研究を進める。
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