研究課題
申請者は、挑戦的萌芽研究「セレノプロテインによるエピジェネティック制御」により、セレン（Se）含有タンパク質の一種、セレノプロテインH (SelH)が、ES細胞において、特定遺伝子領域（標的）のDNAメチル化状況やヒストン修飾に影響を与えていることを発見した。抗酸化酵素としての作用のみが注目されてきたセレノプロテインが、エピジェネティック制御機能を有することを初めて示した。この成果を基盤に、本研究では、生化学的展開を試み、独自に作製された抗SelH特異抗体を用いて、SelH標的ゲノム領域における集積タンパク質群、すなわち、SelH含有エピジェネティック制御複合体の同定を試みる計画である。本年度は、すでに作製してある抗SelH特異抗体を用いて、免疫沈降（IP）を行い、SelH標的ゲノム領域に集積しているタンパク質群（SelH複合体）の濃縮を試みた。ES細胞から調整したクロマチン画分を抗SelH特異抗体に供することに加えて、さらに効率のよい濃縮をめざして、SelH強制発現細胞株より調整したクロマチン画分を用いたIPも行った。非特異的な沈降を完全に避けることは困難であるため、SelHノックダウン細胞株を、非特異的な沈降に対するネガティブコントロールとして用いた。また、申請者が確立したGSTをタグとして有するGST-SelH組換えタンパク質の発現系を用いて精製した組換えGST-SelHに対して、マウスES細胞より調整したクロマチン画分、あるいは、核画分を過剰に供し、組換えGST-SelHに結合するタンパク質群を回収する方法も試みた。SelH含有エピジェネティック制御複合体の濃縮の過程については、概ね順調に遂行している。今後は濃縮した複合体の分離同定を速やかに遂行する予定である。
3: やや遅れている
当初の計画においては、今年度内に、抗体や組換えタンパク質を駆使して、SelH含有エピジェネティック制御複合体の濃縮実現し、さらに、各種電気泳動によって、タンパク質複合体の分離を行う予定であった。当研究課題は、追加内定という形で採択され、開始したため、当初の計画全体を遂行するには、時間に限りがあったというのが実際である。研究実績の概要に記したように、複合体の濃縮の検討については概ね順調であったが、分離についての条件検討は、まだ開始できていないのが現状である。
追加内定という理由で、予定よりも半年短い期間では、全体をこなせなった点は否めない。予定の前半部分に相当するタンパク質複合体の濃縮については、これまでにこれといって、計画を大きく変更しなくてならないような問題点もみあたらず、極めて、順調に遂行していると考えている。今後、タンパク質複合体の分離についての検討を加速し、当初、本年度の計画にふくまれていた複合体の同定へと速やかに移行できるよう鋭意努力する。
追加内定であったため、予定よりも半年短い期間では、時間に限りがあり、計画全体を遂行できなったという事情がある。実際、計画の後半部分に相当するタンパク質複合体の分離検討についてはまだ開始できてない。これに相当する予算として計上していた額が、次年度使用額として、繰り越された。
当初より、平成２７年度の計画としていた、タンパク質複合体の分離の検討を速やかに開始し、次年度使用額分をそれに充当する。SDS-PAGEに加え、２次元電気泳動等の、泳動にかかる試薬一般、またウエスタンブロッティングによる検出に用いる抗体等の購入を予定している。
すべて 2015
すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 オープンアクセス 1件)
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