| 研究課題/領域番号 |
15K07886
|
|---|
| 研究機関 | 富山大学 |
|---|
研究代表者 |
水口 峰之 富山大学, 大学院医学薬学研究部(薬学), 教授 (30332662)
|
|---|
| 研究分担者 |
帯田 孝之 富山大学, 大学院医学薬学研究部(薬学), 准教授 (30578696)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
|
| キーワード | 天然変性蛋白質 / 相互作用 / アロステリック機構 |
|---|
| 研究実績の概要 |
PQBP1は神経細胞において重要な機能を担うスプラシング調節因子であり、その変異は知的障害の原因となる。PQBP1は小さく折りたたまれたWWドメイン（WWD）と長大な天然変性領域からなり、スプライシング調節因子WBP11やスプライソソーム構成因子U5-15kDに結合する。WBP11にはPQBP1-WWDが結合し、U5-15kDにはPQBP1のC末端ドメイン（CTD）に含まれるYxxPxxVLモチーフが結合する。私たちは、PQBP1-WWDとWBP11の相互作用がPQBP1-CTDとU5-15kDの結合に影響を与えるかについて、表面プラズモン共鳴（SPR）の手法で調べた。この実験では、PQBP1の濃度を一定とし、WBP11の濃度を0～200 microMに変化させた。N末端をビオチン化したU5-15kDをセンサーチップ上に固定化し、PQBP1とWBP11の混合溶液を加えてSPRシグナルを観測した。WBP11なしの条件では、PQBP1とU5-15kDが結合することでSPRシグナルが上昇した。一方、WBP11の濃度を上昇させると、PQBP1の濃度が一定であるにも関わらす、SPRシグナルが減少した。このようなSPRシグナルの減少は、高濃度のWBP11存在下では、PQBP1とU5-15kDの結合親和性が低下することを示している。WBP11の462-465残基のPPPG配列をAAAA配列に変異させると、WBP11はPQBP1-WWDに結合しない。このWBP11変異体を用いて同じ実験を行ったところ、PQBP1とU5-15kDの結合親和性の低下は観測されなかった。以上より、PQBP1とWBP11の相互作用は、PQBP1-CTDとU5-15kDの結合を負に調節していることがわかった。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
PQBP1-WWDとWBP11の相互作用が、PQBP1-CTDとU5-15kDの相互作用を負に調節していることを明らかにすることができたため。
|
| 今後の研究の推進方策 |
PQBP1-WWDとWBP11の相互作用が、PQBP1とU5-15kDの相互作用を負に調節するのは、アロステリック機構によると予想された。今後は、天然変性蛋白質PQBP1のアロステリック制御を実験的に検証する実験を行う必要がある。
|
