| 研究課題/領域番号 |
15K07920
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
福本 泰典 千葉大学, 大学院薬学研究院, 講師 (10447310)
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| 研究分担者 |
山口 直人 千葉大学, 大学院薬学研究院, 教授 (00166620)
中山 祐治 京都薬科大学, 薬学部, 教授 (10280918)
山口 憲孝 千葉大学, 大学院薬学研究院, 助教 (80399469)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | DNA損傷応答 / ATR / Rad17 / 9-1-1複合体 / タンパク質－タンパク質相互作用 / 翻訳後修飾 / Src型チロシンキナーゼ / The KYxxL motif |
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| 研究実績の概要 |
[Rad17タンパク質の解析] DNA損傷応答に関わるRad17タンパク質について、9-1-1複合体との相互作用に関わる新規のドメインXを同定し解析した。ドメインXは真核生物のRad17を通じて保存されている約12~14アミノ酸の配列である。ドメインXの欠損によりRad17と9-1-1複合体とのタンパク質間相互作用が消失した。ドメインXには保存性の高いアミノ酸配列として新規のアミノ酸配列モチーフYが存在していた。モチーフYの点変異体によりやはり9-1-1複合体との相互作用が消失した。従ってRad17のドメインXに存在するモチーフYが9-1-1複合体との結合に重要であることが示された。さらにモチーフYのチロシン残基はSrc型チロシンキナーゼによって翻訳後修飾を受けた。以上の実験より、Rad17のドメインXがATR経路の制御を行う分子スイッチである可能性が示唆され、さらにモチーフYの翻訳後修飾が制御に働いている可能性が示唆された。以上の成果をまとめた論文が現在投稿中である。
[受容体型チロシンキナーゼの解析] 受容体型チロシンキナーゼが損傷応答を不活性化する機構の解析を目的として、EGFR, PDGFR/c-Kitファミリーなどの受容体型チロシンキナーゼを標的とする分子標的薬を用いてそれぞれのファミリーを阻害し、ATR経路の不活性化における効果を検討した。いくつかの分子標的薬によってDNA損傷応答からの回復が遅延し、受容体型チロシンキナーゼとDNA損傷応答不活性化との関連が示唆された。
[その他] H27年度の成果をまとめた論文を” The KYxxL motif in Rad17 protein is essential for the interaction with the 9-1-1 complex”としてBiochem Biophys Res Communに発表した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
H27年度の成果をまとめた論文が既に発表済みである。またH28年度の成果をまとめた論文も現在投稿中である。現在はH29年度の計画に従って予備実験を行っており、その過程で予備データを得てきている。
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| 今後の研究の推進方策 |
当初の計画に従い推進する。Src型チロシンキナーゼの下流で働く各種キナーゼによるATM/ATR経路の制御について解析する。各種キナーゼの過剰発現がATM/ATR経路の関連因子に与える影響を中心に解析を行う。過剰発現で影響が観察できたものについて薬剤による阻害等について検討する。
またH29年度の研究計画の一部として、H28年度に同定したRad17のモチーフYのリン酸化による制御等についても解析を行う。
さらにH27年度に発表したRad17のKYxxLモチーフについて9-1-1複合体との相互作用の分子機構についてさらに詳細な解析を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
不要な経費を節約し、さらに研究のポイントを明確に絞った結果として次年度使用額が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度以降の物品費に充てる。またH28年度の成果をまとめた論文が投稿中であるため、この論文の修正実験に伴って発生する経費に充てる。
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