| 研究実績の概要 |
前年度までの解析から、哺乳動物細胞の繊毛小胞形成を制御することが知られているRab11-Rabin8-Rab8-Sec15カスケードに関与するタンパク質をプロテオーム解析により探索し、Rab11と相互作用する候補タンパク質として低分子量GTP結合タンパク質であるpX2を同定した。また、ヒト網膜上皮由来RPE1細胞を用いた解析から、pX2が中心小体に局在すること、pX2が一次繊毛形成に関与すること、一次繊毛形成を抑制するタンパク質CP110の中心小体からの乖離にpX2が必要であることが示唆されていた。さらに、免疫沈降法を用いた解析からpX2とRab11が共沈降することも示されていた。
本年度は、pX2とRab11の結合を詳細に解析するために、両者のリコンビナントタンパク質を大腸菌発現系を用いて精製した。これらの精製タンパク質を用いてpX2とRab11の結合を評価したところ、両者の共沈降が認められたことからpX2とRab11は直接結合することが示唆された。pX2, Rab11ともに低分子量GTP結合タンパク質であることから、両者の結合に対するグアニンヌクレオチド依存性を調べたところ、特定のグアニンヌクレオチド型で結合することが分かった。以上の結果から、pX2はRab11との結合を介して一次繊毛形成に関与する可能性が示唆された。また、ゲノム編集技術を用いてpX2をノックアウトしたRPE1を作成しており、今後表現型の解析を進める予定である。さらに、一次繊毛形成時におけるpX2の局在様式も詳細に検証する予定である。
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