IL-27/IL-35共通サブユニットEBI3による新しい蛋白質発現の制御機構

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K07947
• 研究機関: 東京医科大学
• 研究代表者: 溝口 出 東京医科大学, 医学部, 講師 (00569527)
• 研究分担者: 善本 隆之 東京医科大学, 医学部, 教授 (80202406)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: EBI3 / IL-23R / 腸炎 / カルネキシン

研究実績の概要

(1) Truncated EBI3生成の意義その作用機序：ナーブCD4+T細胞を抗CD3抗体と抗CD28抗体で刺激するとEBI3発現が増強されるが、この刺激の際、プロテオソーム阻害剤を共存させておくと、分子量の若干小さいEBI3が発現され、リソソーム阻害剤ではそのような現象は見られなかった。これは、プロテオソーム阻害剤による小胞体ストレスにより、Caspaseが活性化されて切断された可能性が一番高いと考えられ、現在、さらに検討中である。
(2) EBI3とIL-23R蛋白質発現の相関性とその意義：ヒトゲノムGWAS解析により、IL-23Rの遺伝子多型G149R、V362I、R381Q変異が、いずれもIL-23Rの蛋白質発現の安定性の低下により発現が低下し、炎症性腸疾患発症と負の相関がある。この内、G149Rだけが細胞外領域である。そこで、この変位を持つIL-23R変異体を作製したところ、この変異体へのEBI3の結合性が低下し、EBI3によるIL-23Rの発現増強効果も減弱することがわかった。つまり、この部位がEBI3の結合部位であり、ヒトの腸炎発症にも関与している可能性が示唆された。
(3) EBI3が結合する他の分子の探索：我々は、EBI3が特に炎症時に、細胞分泌蛋白質および細胞膜蛋白質の発現増強と安定化に重要な役割を担っていることを一般化するため、EBI3が結合する分子について探索を行った。その結果、IL-23RやMHCクラスIの他に、gp130にも結合することがわかった。EBI3をHEK293T細胞に強制発現するとFACS解析によりEBI3の発現が細胞表面上に観察され、siRNAによりgp130発現を低下させると、EBI3の細胞表面発現も低下すること、再構成を用いた免疫沈降反応の解析によりEBI3とgp130が共沈することを見出した。現在さらに検討中である。

研究成果

• [雑誌論文] Interleukin-27 exerts its antitumor effects by promoting differentiation of hematopoietic stem cells to M1 macrophages. (2018)
  • 著者名/発表者名: Chiba Y, Mizoguchi I, Furusawa J, Hasegawa H, Ohashi M, Xu M, Owaki T, Yoshimoto T.
  • 雑誌名: Cancer Res. 巻: 78(1) ページ: 182-194
  • DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-17-0960
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Regulation of myelopoiesis by proinflammatory cytokines in infectious diseases. (2018)
  • 著者名/発表者名: Chiba Y, Mizoguchi I, Hasegawa H, Ohashi M, Orii N, Nagai T, Sugahara M, Miyamoto Y, Xu M, Owaki T, Yoshimoto T.
  • 雑誌名: Cell. Mol. Life Sci. 巻: 75(8) ページ: 1363-1376
  • DOI: 10.1007/s00018-017-2724-5
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Protective effects against tumors and infection by IL-27 through promotion of expansion and differentiation of hematopoietic stem cells into myeloid progenitors. (2018)
  • 著者名/発表者名: Orii N, Mizoguchi I, Chiba Y, Hasegawa H, Ohashi M, Xu M, Nagai T, Ochiai M, Mochizuki Y, Owaki T, Yoshimoto T.
  • 雑誌名: Oncoimmunology 巻: - ページ: -
  • DOI: org/10.1080/2162402X.2017.1421892
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prediction of chemical respiratory and contact sensitizers by OX40L expression in dendritic cells using a novel 3D co-culture system. (2017)
  • 著者名/発表者名: Mizoguchi I, Ohashi M, Chiba Y, Hasegawa H, Xu M, Owaki T, Yoshimoto T.
  • 雑誌名: Front. Immunol. 巻: 8:929 ページ: -
  • DOI: 10.3389/fimmu.2017.00929
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] A novel role for EBI3 to augment IL-23Rα protein expression through a lectin chaperone calnexin. (2018)
  • 著者名/発表者名: Mizoguchi, I., Ohashi, M., Hasegawa, H., Chiba, Y., Orii, N., Kan, S., Xu, M., Ochiai, N., Owaki, T., and Yoshimoto, T.
  • 学会等名: 東京医科大学記念館ポスター発表懇談会
• [学会発表] A novel antitumor activity of IL-27 by promoting the differentiation of HSCs to antitumorigenic M1-like macrophages in tumor-bearing mice. (2017)
  • 著者名/発表者名: Chiba, Y., Ohashi, M., Hasegawa, H., Xu, M., Owaki, T., Mizoguchi, I., and Yoshimoto, T.
  • 学会等名: The 2nd International Conference on Cytokine Signaling in Cancer
  • 国際学会
• [学会発表] IL-27/IL-35共通サブユニットEBI3によるIL-23Rの新しい蛋白質発現安定化機構 (2017)
  • 著者名/発表者名: 溝口出、千葉祐規乃、長谷川英哲、大橋美緒、中村涼乃、折井直子、干詩宇、徐明利、大脇敏之、善本隆之
  • 学会等名: 第6回医薬工3大学包括連携推進シンポジウム
• [学会発表] A novel role for Epstein-Barr virus-induced gene 3 to augment IL-23 receptor α protein expression through a lectin chaperone calnexin. (2017)
  • 著者名/発表者名: Mizoguchi, I., Ohashi, M., Hasegawa, H., Chiba, Y., Xu, M., and Yoshimoto, T.
  • 学会等名: 第46回日本免疫学会総会・学術集会
• [学会発表] 炎症時の新しい蛋白質発現の増強機構 (2017)
  • 著者名/発表者名: 溝口 出
  • 学会等名: Annual Meeting 2017医学総合研究所 研究発表会