研究実績の概要 |
これまでの実験で確立した中枢神経再生モデルを利用して、損傷後に再生する神経線維の髄鞘化を誘導する実験を行った。まず、麻酔した生後2日の新生児ラットの左外側嗅索を、手術用顕微鏡下で鋭利に切断した。外側嗅索が完全に切断されていることを確認するため、逆行性の神経トレーサーであるFB(Fast Blue)を、切断部より後方の嗅皮質へ注入した(1%, 0.1μl)。外側嗅索は脳内の嗅覚伝導路で、これまでの実験から、新生児期に切断されても自然再生が起こることを報告している。手術後は母ラットの元に戻し生育させ、生後5日から生後20日まで毎日1回、アセチル-L-カルニチン(100 mg/kg)を腹腔内に投与した。同量の生理食塩水を投与したラットをコントロール群とした。生後30日目に灌流固定し、脳を採取した。嗅球から作成した矢状断の凍結切片(50μm厚で150μm間隔)を蛍光顕微鏡で観察し、外側嗅索の不完全切断例を除外した。不完全切断例では、切断直後に注入したFBが残存する神経線維に取り込まれ、逆行性に運ばれ、嗅球内にFB陽性の僧帽細胞が観察された。嗅球内にFB陽性僧帽細胞が観察されない動物を完全切断例とした。完全切断例において、嗅皮質を含む残りの脳から前額断の凍結切片(50μm厚で300μm間隔)を作成し、抗MBP(Myelin basic protein)抗体を用いた免疫染色を行い、外側嗅索内の神経線維の髄鞘を検出した。また、一部の切片から外側嗅索を含む部位を切り出し、超薄切片を作成後、電子顕微鏡で観察した。MBP染色切片の観察および電子顕微鏡観察の結果、アセチル-L-カルニチン投与群における外側嗅索内の再生神経線維の髄鞘形成が増加している可能性が示唆された。
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