| 研究課題/領域番号 |
15K08284
|
|---|
| 研究機関 | 獨協医科大学 |
|---|
研究代表者 |
杉本 博之 獨協医科大学, 医学部, 教授 (00235897)
|
|---|
| 研究分担者 |
安戸 博美 獨協医科大学, 医学部, 助教 (10704885)
青山 智英子 獨協医科大学, 医学部, 助教 (90420778)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2019-03-31
|
| キーワード | オキシステロール / 25ーヒドロキシコレステロール / コレステロール25ヒドロキシラーぜ / HMG-CoAレダクターゼ / ET |
|---|
| 研究実績の概要 |
生体膜の脂質の組成比はほぼ等量に保たれている。そこで脂質合成の律速酵素が同様な転写や活性制御を受けていると考え解析を進め、結果、コレステロール合成の律速酵素 HMG-CoAレダクターゼ(HMGCR)および生体膜を構成するリン脂質ホスファチジルエタノールアミン合成の律速酵素CTP:ホスホエタノールアミン・シチジリルトランスフェラーゼ(ET)の転写や活性が、同様な容量依存性を示し細胞培養液中のFBS濃度の増加(0.5～10%)で抑制されることを見いだした。そこでFBSに含まれるこれら律速酵素の転写抑制因子の同定を行い、この因子がリポタンパク質などに含まれるオキシステロールであることを見いだし報告した。
オキシステロールは細胞外からリポタンパク質を介して細胞に取り込まれるが、細胞自身もコレステロール25-ヒドロキシラーゼ(CH25H)によりコレステロールからオキシステロールである25-ヒドロキシコレステロール(25-HC)を産生する。そこで、細胞レベルでCH25Hの活性調節機構と内因性25-HCの産生がどのような調節を受けるのか興味を持ち解析を行った。その結果、申請者はFBS中にCH25Hの転写を抑制する因子が存在することをはじめて見いだした。FBS由来の精製分画をNIH3T3細胞に添加し、CH25HのmRNA量をRT-PCRにより測定し、FBSに由来する転写抑制因子の精製を試みた。
その結果、本抑制因子はBligh-Dyer法の水溶性画分に存在し,HPLC逆相C18カラムに結合しアセトニトリルにより溶出する分子であった。この抑制因子の分子量フィルター解析や、protease Kおよびglycopeptidase Fの処理により失活することから糖タンパク質ではないかと推測し、精製を進め、分子同定を進めているところである。
|
