研究課題
ゲノムワイドプール型レンチウィルスshRNAライブラリーを用い、悪性中皮腫、ぶどう膜黒色腫、腎淡明細胞がんなどの原因遺伝子の一つであるBAP1変異に対し、合成致死表現型を示す遺伝子をスクリーニングした。前年度までに、得られた候補遺伝子のうち、DNA修復に関わる脱ユビキチン化酵素USP1について集中して解析を進めることとした。前年度において、接着培養状態においてはBAP1変異とUSP1のノックダウンが合成致死表現型を示すことを明らかとしたが、本年度では、１）非足場依存性増殖においても合成致死表現型は保たれること、２）BAP1過剰発現によるFANCD2の脱ユビキチン化については細胞周期の影響はないこと、３）FANCD2のユビキチン化酵素複合体のサブユニットの一つであるFANCCのノックダウンでは合成致死表現型は示さないことが明らかとなった。今年度においては、1) BAP1変異とUSP1の合成致死表現型が個体でも再現できるかどうかを検討する、2) BAP1の機能のうちどれがUSP1のノックダウンと合成致死表現型を示す原因になるのかを明らかにする、3) FANCD2のユビキチン化が合成致死表現型の原因になっていることが判明した場合、BAP1がFANCD2を脱ユビキチン化をすることができるかどうかについてin vitroでアッセイを行う、4) BAP1変異株、および過剰発現株においてUSP1をノックダンした時のタンパクのユビキチン化状態を網羅的に探索する、5）候補遺伝子群に関して、新規分子診断マーカーとしての有用性を検討する、などを進める予定である。また、別の候補遺伝子であるCHK2キナーゼについても、阻害剤PV1019を用いた担がんマウスでの表現型の検討、分子機構の解析を引き続き行なっていく。
3: やや遅れている
11月に現在の所属である順天堂大学に移動した。移動前後に研究は停止してしまい、実験を再開できるようになったのは年度末近くであったため研究の進捗状況は「やや遅れている」と判断した。本年度は、昨年度に引き続き悪性中皮腫の原因遺伝子の一つBAP1と合成致死表現型を示す遺伝子のうち、DNA損傷修復に関わるUSP1に集中し解析を進めた。その結果、１）非足場依存性増殖においても合成致死表現型は保たれること、２）BAP1過剰発現によるFANCD2の脱ユビキチン化については細胞周期の影響はないこと、３）FANCD2のユビキチン化酵素複合体のサブユニットの一つであるFANCCのノックダウンでは合成致死表現型は示さないこと、が明らかとなった。
平成29年度の進捗状況を受け、平成30年度は以下のように研究を推進していく予定である。1) BAP1変異とUSP1の合成致死表現型が担がんマウスによっても再現できるかどうかを検討する。その際、膜透過性核酸およびML323を使用する。また、PV1019を用いた担がんマウスについても検討を続ける。2) BAP1変異がある悪性中皮腫細胞株に、BAP1の種々の変異体を発現させ、BAP1の機能のうちどの部分がUSP1のノックダウンと合成致死表現型を示す原因になるのかを明らかにする。3) FANCD2のユビキチン化が変化している状態が合成致死表現型を示す原因になっているかどうかを検討するために、ユビキチン化ができないFANCD2を発現させてBAP1変異とUSP1ノックダウンによる合成致死表現型がレスキューできるかどうか検討する。4) 3)によりFANCD2のユビキチン化が合成致死表現型の原因になっていることが判明した場合、BAP1がFANCD2を脱ユビキチン化をすることができるかどうかについてin vitroでアッセイを行う。5) FANCD2が標的でなかった場合に備え、BAP1変異株、および過剰発現株においてUSP1をノックダウンした時のタンパクのユビキチン化状態を網羅的に探索する。6）候補遺伝子群に関して、新規分子診断マーカーとしての有用性を検討する。
11月に愛知県がんセンターから順天堂大学に移動したため、移動前後で研究ができない期間が生じたため、次年度使用額が生じた。
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Cancer Letters
巻: 385 ページ: 215～224
10.1016/j.canlet.2016.10.020
Chemical Communications
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